胎盘来源3D球体间充质干细胞对大鼠脑缺血/再灌注损伤过程中炎性细胞因子的影响

摘要

目的:
　　观察胎盘来源3D球体间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的影响。探讨MSCs对大鼠脑缺血后神经功能的可能性保护机制。为胎盘来源3D球体MSCs应用于脑缺血损伤治疗提供理论依据。
　　方法:
　　实验使用动物被随机分为假手术组、溶剂对照组、间充质干细胞（MSCs）治疗组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型，缺血2h后拔除鱼线进行再灌注，神经功能评分选择模型，应用荧光显微镜观察海马区标记MSCs分布，各组大鼠分别于干预处理后第1、3和7天(1d、3d、7d)进行神经功能评分后断头取脑，尼氏染色方法观察缺血区神经元形态变化，运用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法和RT-PCR检测大鼠脑组织中TNF-ɑ、IL-6和IL-10表达量变化。
　　结果:
　　标记的MSCs在海马区有表达；与对照组相比，治疗组大鼠7d神经运动功能有明显改善(F=29.996,t=2.236,n=6，p<0.05)，尼氏染色缺血区神经元数量增多，形态较完整。ELISA测各时间点MSCs组大鼠脑组织中TNF-ɑ和IL-6蛋白含量显著降低(F=112.525~362.381，t=8.053~22.268,P<0.01)，而脑组织IL-10蛋白表达含量显著升高(F=289.593~976.587,t=10.740~28.449,P<0.01)。RT-PCR结果：各时间点MSCs组大鼠脑组织中TNF-ɑ和IL-6mRNA表达量显著低于对照组(F=116.502~466.271,t=7.208~23.168,P<0.01)，而脑组织IL-10 mRNA表达量显高于对照组(F=80.492~582.995,t=7.811~16.912,P<0.01)。
　　结论：
　　MSCs对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用，其作用机制可能与下调脑组织中TNF-ɑ、IL-6含量，上调IL-10含量有关。

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引言

第一章 实验材料

1.1实验动物

1.2实验器材及材料

1.3主要仪器

1.4 主要实验试剂

第二章 研究方法

2.1 实验动物分组

2.2模型制作及实验方法

2.3 标本取材

2.4 TTC染色

2.5尼氏体染色

2.6 RT-PCR检测大鼠脑组织中炎性因子mRNA的表达

2．7 ELISA检测大鼠脑组织中炎性因子蛋白的表达

2.8统计学处理

2.9相关图片

第三章 结果

3.1 TTC染色结果

3.2 DiL标记的MSCs在脑组织中的分布

3.3神经功能评分

3.4 MSCs对大鼠神经元结构功能的影响（尼氏染色）

3.5 MSCs对缺血再灌注大鼠脑组织TNF-ɑ、IL-6、L-10 mRNA 表达影响

3.6 MSCs 对缺血再灌注大鼠脑组织TNF-ɑ、IL-6、L-10浓度表达的影响

第四章 讨论

4.1 脑梗死治疗的现状

4.2普通间充质干细胞治疗方案的不足

4.3 胎盘来源3D球体间充质干细胞的可行性

4.4检测指标的选取

4.5 实验结果讨论与分析

参考文献

附录

综述: 间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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