人乳头瘤病毒整合状态与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的相关性研究

摘要

目的：
　　1.探讨宫颈上皮内瘤变（Cervical Intraepithelial Neoplasia，CIN）及宫颈癌（Cervical Ccancer，CC）组织中人乳头瘤病毒（Human Papillomaviruses，HPV）的整合状态和基因型分布。
　　2.探讨宫颈癌组织中HPV16和HPV58的基因整合规律，整合位点分布及整合基因功能，分析其整合与宫颈癌临床病理之间的联系。
　　方法：
　　收集2008年5月至2013年5月在青岛大学医学院附属医院行宫颈冷刀锥切术和宫颈癌根治术并具有完整病例资料患者的病理组织蜡块共149例，通过全基因组测序和高通量病毒整合检测方法，检测149例标本中HPV整合型别及其整合位点信息。
　　结果：
　　1.149例宫颈上皮内瘤变和宫颈癌患者的平均年龄为42.30±7.49岁，93例检测到HPV的整合，其平均年龄为41.34±6.84岁。＜45岁CIN及宫颈癌患者的HPV整合率高于≥45岁患者。
　　2.149例组织样本中，有93例发生了HPV的整合，其整合率为62.42％，HPV整合率随其病变严重程度加重而升高（p＜0.01）。HPV在CIN3和宫颈癌中的整合率均明显高于CIN1和CIN2（p均＜0.01）。在93例发生整合的病例中，HR-HPV整合率为83.87%，HR-HPV整合率随病变严重程度增加而升高（p＜0.01）。
　　3.在149例宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织标本中前五种常见的整合基因型（根据整合率递减）为：HPV16（42.28%）,58（20.13%），31（18.12%），35（16.11%）和33（8.05%）；在35例CIN1标本中，依次为HPV58（11.43%），52（8.57%）和56/66/68（均为5.71%）；在35例CIN2标本中，依次为HPV16/58(均为14.29%)，33/66(均为8.57%)和52（5.71%）；43例CIN3组织标本中仅检测出4种基因型整合，依次为HPV16（65.12%），58（16.28%），33（6.98%）和31（2.33%）；在36例宫颈癌组织标本中，依次为HPV16（80.56%），31（69.44%），35（66.67%），58（38.89%）和51（22.22%）。
　　4.149例宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织标本中，检测到多种型别的HPV整合。宫颈癌多重整合率达100%，明显高于CIN组织中多重整合率（p＜0.01）；在CIN组织中，HPV的多重整合率无明显变化趋势，与病变程度无相关性（p＞0.05）。CIN的HPV单一整合率明显高于宫颈癌组织（p＜0.01）；在CIN中，HPV的单一整合率均高于多重整合，且随病变程度的加重而升高（p＜0.05）。
　　5. HPV16在所有宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的整合率达42.28%，整合位点广泛分布于1号到X染色体，其中1号，2号，4号，X和5号染色体上发生整合的样本数最多。HPV58在所有CIN及CC中的整合率达20.13%，整合位点也广泛分布于1号到X染色体，其中5号，9号，2号，3和4号染色体上发生整合的样本数最多。HPV病毒断裂可发生在E6到LCR中的任何基因，最常见的部位是L1和E1基因。在29例检测到HPV16整合组织中，有17例的整合发生在基因启动子区域，在14例HPV58整合组织中，有1例检测出启动子区域的整合，在所有的94个整合位点所在的基因及其邻近基因中，不乏与肿瘤发生及免疫功能相关的基因。
　　6. HPV16和HPV58的整合均与宫颈癌的临床分期有关（p均＜0.05）。当病理类型为鳞癌，宫颈间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累时，HPV16的整合率升高；当年龄≥50岁，组织学分化为中-低分化，宫颈间质浸润深度≥1/2，淋巴血管间隙受累和淋巴结转移时，HPV58的整合率升高，虽然两种病毒的整合率在这些病理因素中均无统计学意义，但仍提示病毒整合是以上临床病理因素可能的危险因素，而病毒多次整合是宫颈间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累可能的的高危因素。
　　结论：
　　1. HPV DNA整合更易发生于45岁以下的女性，故对于45岁以下宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者应加强随访管理。
　　2. HPV和HR-HPV整合在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中均有发生，其整合率随其病变严重程度的加重而升高，提示HPV整合在宫颈癌发生和发展过程中发挥重要作用。宫颈癌组织中多重整合率升高，而CIN组织中的单一整合率又与病变严重程度相平行，提示在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的不同发展阶段，HPV单一或多重的整合特点不尽相同，说明HPV整合在病变的发生发展过程中发挥不同的作用。
　　3.青岛地区宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中常见的HPV整合型别为：HPV16，58，31，35和33；随着疾病严重程度的加重，HPV不同型别的整合检出率发生变化。
　　4. HPV16和HPV58基因可广泛整合至宿主各染色体，分布无规律性。HPV病毒断裂可发生在E6到LCR中的任何区域。L1基因是HPV16和HPV58最常见的断裂部位，其次为E1基因。HPV16和HPV58整合位点均容易出现在肿瘤发生相关基因和免疫相关基因附近。
　　5.在宫颈癌组织中，HPV16和HPV58整合事件发生与频率随临床分期加重而升高；整合事件更容易发生在宫颈间质浸润深度≥1/2和淋巴血管间隙受累的样本中。

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引言

第1章 宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中人乳头瘤病毒整合状态的研究

1.1材料与方法

1.1.1研究对象

1.1.2实验试剂

1.1.3主要仪器

1.1.4实验方法

1.1.5统计学处理

1.2 结果

1.2.1临床资料汇总

1.2.2 宫颈上皮内瘤变及宫颈癌患者年龄分布

1.2.3宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中HPV及HR-HPV的整合率

1.2.4 宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中整合的HPV型别分布

1.2.5 单一或多重HPV整合与病变程度的相关性

1.3 讨论

1.4 结论

第2章 宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中HPV16和HPV58整合位点的分布及意义

2.1材料与方法

2.1.1研究对象

2.1.2实验试剂

2.1.3主要仪器

2.1.4实验方法

2.1.5统计学处理

2.2 结果

2.2.1 HPV16和HPV58在宿主基因组的分布

2.2.2 HPV16和HPV58病毒基因断裂带的分布

2.2.3 宫颈癌中HPV16和HPV58常见整合位点统计分析

2.2.4 HPV16和HPV58整合分别与宫颈癌临床病理特征的关系

2.3 讨论

2.4 结论

参考文献

综述: 宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中基因的改变

攻读学位期间的研究成果

致谢

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