GLUT9基因启动子区痛风易感SNP位点功能的研究

摘要

目的：前期研究发现人葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)基因启动子区SNP rs13124007位点G/C与中国汉族男性的痛风易感性显著相关。本研究拟进一步开展功能研究探讨该SNP是否通过影响GLUT9基因启动子的活性，进而引起痛风发生。
　　方法：PCR扩增包含GLUT9基因启动子区SNP rs13124007位点在内的DNA片段，构建野生型（pGL3-basic-GLUT9/G）和突变型（pGL3-basic-GLUT9/C）质粒，将质粒瞬时转染至293T细胞使其在细胞内表达，通过双荧光素酶报告系统研究 SNP rs13124007 G/C对GLUT9启动子区激活能力的影响，通过凝胶迁移率（EMSA）实验观察两种等位基因型探针转录因子结合情况。
　　结果：重组质粒经测序鉴定，证明目的片段已成功插入，且序列方向正确，重组质粒构建成功。双荧光素酶报告系统显示pGL3-basic-GLUT9/C较pGL3-basic-GLUT9/G对启动子激活能力下降(P?0.05)。EMSA结果显示rs13124007位点等位基因为C时较等位基因G缺少转录因子IRF-1结合位点，且可能致原有转录因子结合活性发生变化或产生新的转录因子结合序列。
　　结论：GLUT9基因启动子区SNP rs13124007通过影响启动子的活性进而影响GLUT9基因的表达，这一作用有可能是通过IRF-1实现的，对深入理解中国汉族男性痛风的发生机制提供理论基础。

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引言

第1章 材料和方法

1.1主要仪器

1.2 主要试剂

1.3 实验方法

第2章 实验结果

2.1 载体构建

2.2 双荧光素酶报告系统检测基因突变对启动子激活能力的影响

2.3 EMSA实验观察两种等位基因型探针转录因子结合情况

第3章 讨论

结论

参考文献

综述: 葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）基因与原发性高尿酸血症及痛风相关性研究

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

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