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蛋白激酶活性的光电化学生物分析研究

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摘要

由蛋白激酶调节的蛋白磷酸化在新陈代谢、基因转录、分化及衰老、细胞信号传导等方面中起着非常重要的作用。因此,快速而准确检测蛋白激酶的活性意义重大。光电化学技术是一种新兴的检测手段,具有背景信号低、灵敏度高等优点。围绕如何既能选择性的识别磷酸化肽段,又能同时进行信号放大,这两个蛋白激酶活性高灵敏分析的关键问题,本研究工作构建了三类新型光电化学生物传感器并成功应用于蛋白激酶活性分析及抑制剂筛选。本工作不仅为与蛋白激酶有关的医疗诊断和药物研发方面提供理论依据,而且对研究分子层面细胞内信号传导有重要的参考价值。
  本研究基于局域表面等离子体效应及染料敏化效应的机制,构建了一种新型光电化学生物传感器,并应用于检测蛋白激酶的活性。在光激发下,纳米金发生局域表面等离子体效应,不仅提高[Ru(bpy)3]2+染料吸收光子的效率,并且其自由电子跃迁到电极上继续增大光电流响应。同时纳米金具有出色的导电能力及大比表面积,极大的提高了检测蛋白激酶的灵敏度,检测限达到0.005 U mL-1(S/N=3)。对激酶抑制剂的筛选实验证明其可成功应用于蛋白激酶抑制剂的筛选。金属有机骨架UiO-66磷酸根的识别及信号放大为一体,构建了新型光电化学生物传感器,并将其应用于检测蛋白激酶活性及蛋白激酶抑制剂的筛选。首次提出利用UiO-66中的Zr-O与磷酸根具有强亲和力和高孔隙率、表面积大的特点将负载染料[Ru(bpy)3]2+的UiO-66修饰到电极上。本方法对蛋白激酶检测限为0.0049 U mL-1(S/N=3),同时可用于蛋白激酶激酶抑制剂筛选。基于激子-等离子激元能量转移效应的原理,构建了新型光电化学生物传感器用来检测蛋白激酶的活性。纳米金和CdS量子点吸收锋发生重叠,激发时会发生激子-等离子体激元相互作用,使光电流发生变化,以此检测蛋白激酶的活性。不仅如此,该生物传感器应用到不同刺激处理的MCF-7细胞裂解液中蛋白激酶的活性分析,获得了满意的结果。

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