EB病毒感染对IGF2基因甲基化和印迹表达影响的研究

摘要

目的：明确EBV感染对胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2，IGF2)编码基因启动子区甲基化、印迹状态及表达的影响，探讨IGF2基因与EBVaGC发生发展的关系。
　　方法:亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisufite genomic sequencing，BGS)检测EBV阳性和阴性细胞系以及EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)和EBV阴性胃癌(EBV-negatived gastric carcinoma，EBVnGC)组织中IGF2基因启动子区甲基化状态。聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)分析检测 EBVaGC和EBVnGC及癌旁组织标本中IGF2基因印迹状态。实时荧光定量PCR(Real time quantitative PCR，real time qPCR)检测EBVaGC和EBVnGC组织中IGF2 mRNA的转录表达；免疫组化技术检测EBVaGC，EBVnGC及癌旁组织中IGF2蛋白表达。
　　结果：①BGS结果显示EBV阳性和阴性细胞系中IGF2基因均为高甲基化；EBVaGC组织平均甲基化率为38.17％，EBVnGC组织平均甲基化率为23.06%，统计分析显示EBVaGC组织中IGF2基因启动子甲基化水平明显高于EBVnGC组织(P<0.05)。②EBVaGC组织中IGF2印迹缺失率为61.3%(61.3%,19/31)；EBVnGC组织中IGF2印迹缺失率为33.3%(33.3%,15/45)。EBVaGC组织中IGF2印迹缺失率高于EBVnGC组织，两者存在显著性差异(χ2=5.803，P<0.05)；③EBVaGC和EBVnGC组织中IGF2 mRNA转录表达无显著性差异(P>0.05)。④IGF2蛋白表达在EBVaGC和EBVnGC组织中无显著差异(P>0.05)；胃癌组织中IGF2蛋白明显表达高于癌旁组织(P<0.05)。
　　结论：①EBV感染可诱发IGF2基因启动子的高甲基化和IGF2基因印迹丢失。②未观察到EBV感染、IGF2基因甲基化和印迹状态对IGF2转录和表达的影响，表明IGF2表达的调控机制较为复杂，可能有多种因素的共同调节。③胃癌组织中IGF2蛋白的高表达表明其可能参与胃癌的发生发展。