RAGE介导的JNK/AP-1/Caspase3信号通路对PD模型小鼠的损伤作用及机制研究

摘要

目的：探讨晚期糖基化终末产物受体（RAGE）介导的JNK/AP-1/caspase3信号通路对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）模型小鼠可能存在的损伤作用及其作用机制。
　　方法：采用12周龄的C57BL/6雄性小鼠依据不同处理方法分为6组（均n=10）：对照组；MPTP组；空载病毒阴性对照（RAGE-NC）组；目的基因阴性对照（siRNA-RAGE）组；RAGE-NC+MPTP组；siRNA-RAGE+MPTP组。携带空载siRNA的慢病毒（RAGE-NC）与携带抑制 RAGE表达的目的 siRNA-RAGE慢病毒经脑立体定位仪定位注射于小鼠两侧黑质，MPTP组、RAGE-NC+MPTP组以及siRNA-RAGE+MPTP组给予腹腔注射MPTP30 mg·kg-1（每周2次×5周），对照组给予腹腔注射等量生理盐水（每周2次×5周），RAGE-NC组与 siRNA-RAGE组不进行腹腔注射。利用爬杆试验检测小鼠运动协调能力，应用免疫组织荧光染色方法检测各组小鼠脑组织黑质中的TH数量的变化情况，采用Western blots法分别检测各组 RAGE蛋白表达水平及其下游产物 JNK、p-JNK、Bcl-2、Bax、caspase3的蛋白表达水平，以及 TH蛋白表达水平。并用HPLC法检测各组小鼠纹状体多巴胺及其代谢产物二羟苯乙酸、高香草酸含量。
　　结果：
　　1.爬杆试验中，与对照组比较，MPTP组、RAGE-NC+MPTP组小鼠爬杆掉头时间与爬杆总时间均增加，差异有统计学意义（P＜0.01）；siRNA-RAGE+MPTP组、RAGE-NC组小鼠爬杆掉头时间与爬杆总时间均较RAGE-NC+MPTP组时间减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　2.黑质多巴胺能神经元免疫荧光染色结果显示，与对照组比较，MPTP组、RAGE-NC+MPTP组小鼠中脑黑质 TH阳性多巴胺能神经元计数显著减少（P＜0.05）；与RAGE-NC+MPTP组比较，siRNA-RAGE+MPTP组和RAGE-NC组小鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。RAGE-NC组和siRNA-RAGE组小鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量与对照组比较无显著差异。3. Western blots结果显示，与对照组相比，MPTP组、RAGE-NC+MPTP组小鼠脑内 RAGE蛋白表达量增加（P＜0.001），p-JNK/JNK比值升高（P＜0.001），Bcl-2/Bax比值明显降低（P＜0.001），caspase3蛋白表达量增加（P＜0.001），TH蛋白表达量降低（P＜0.001）；与 RAGE-NC+MPTP组比较，siRNA-RAGE+MPTP组RAGE蛋白表达减少（P＜0.01），p-JNK/JNK比值显著降低（P＜0.01），而 Bcl-2/Bax比值明显增高（P＜0.001），caspase3蛋白表达量减少（P＜0.001），TH蛋白表达量升高（P＜0.05）；RAGE-NC组小鼠黑质内 RAGE、p-JNK/JNK、caspase3表达较 RAGE-NC+MPTP组减少，而 Bcl-2/Bax比值、TH蛋白表达较 RAGE-NC+MPTP组增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　4. HPLC结果显示，与对照组比较，MPTP组、RAGE-NC+MPTP组小鼠多巴胺及其代谢产物二羟苯乙酸、高香草酸含量均显著减少（P＜0.001）；与RAGE-NC+MPTP组比较，siRNA-RAGE+MPTP组和RAGE-NC组小鼠多巴胺及其代谢产物二羟苯乙酸、高香草酸含量均增加（P＜0.05），差异有统计学意义。
　　结论： RAGE通过介导JNK/AP-1/caspase3信号通路发挥对PD模型小鼠脑内多巴胺能神经元的损伤作用，其机制可能是通过诱导凋亡反应来实现的，因此，抑制RAGE的表达有潜在的神经保护作用。

目录

引言

材料与方法

1.实验动物和分组

2.PD模型小鼠的制备

3.免疫荧光染色

4.Western blots 法检测 RAGE、p-JNK、JNK、Bcl-2、Bax 和caspase3、TH蛋白表达量

5.高效液相色谱法（HPLC）检测小鼠纹状体多巴胺（DA）及其代谢产物二羟苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）

6.统计学方法

实验结果

1.抑制RAGE表达可改善小鼠类PD症状

2.慢病毒注射组小鼠黑质中RAGE蛋白表达情况

3.抑制RAGE表达对MPTP诱导的PD模型小鼠脑内黑质TH阳性神经元的影响

4.各组 PD小鼠模型 SN中 p-JNK/JNK、Bcl-2/Bax、caspase3蛋白、 TH蛋白的表达情况

5.抑制RAGE表达延缓了MPTP诱导的PD模型小鼠模型黑质纹状体神经通路中多巴胺能神经元的变性并保护了其功能

讨论

结论

参考文献

综述:帕金森病与晚期糖基化终末产物受体的研究进展

攻读学位期间的研究成果

缩略词表

致谢

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