应力诱导细胞凋亡过程中活性氧与内质网应激作用机制的研究

摘要

目的：探讨在机械应力诱导软骨细胞凋亡的过程中，细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）与内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）表达情况及两者在此作用过程中的相互作用关系
　　方法：分离培养人膝关节软骨细胞，用应力加载系统分别将培养的细胞加载0h,6h,12h,24h和48h，分别在各受力组中加入抗氧化剂N－乙酰半胱氨酸（NAC）和半胱氨酸蛋白酶12（caspase12）特异性抑制剂Z-ATAD-FMK作为抑制剂组，应用RT-PCR检测各组细胞中凋亡相关基因 Bcl-2、Bcl-2相关 x蛋白(Bcl, associatedX protein，Bax)及caspase12 mRNA表达量；western blot检测各组细胞中Caspase-12蛋白表达量;DCFH-DA法检测细胞中ROS的含量；流式细胞术检测细胞凋亡率。
　　结果：RT-PCR检测6 h受力组Bax和caspase-12相对表达量增加，24 h达峰值，48 h有所回降，而Bcl-2相对表达量6 h后开始下降，12 h降到最低，24 h开始回升；ROS含量结果检测6h受力组表达量增加，24h达到峰值，48h有所回落；NAC抑制剂组 ROS、Bax、caspase-12表达量均下降，Bcl-2升高。Z-ATAD-FMK抑制剂组caspase-12表达量下降，而ROS表达量不变，Western-Blot检测caspase-12蛋白表达与相应基因表达趋势相一致。凋亡检测结果与受力组caspase12表达趋势相似：6 h受力组凋亡率开始增加，24 h达峰值，48 h凋亡率有所回降；
　　结论：机械应力可激活内质网应激途径介导软骨细胞凋亡，而且在此过程中，活性氧可能作为内质网应激上游信号分子参与其中。

目录

引言

材料和方法

1 实验材料

2 细胞培养

3目的基因检测

4 Western Blot检测软骨细胞中caspase-12蛋白表达量

5 ROS含量检测

6细胞凋亡检测

7 统计学分析

实验结果

1 正常软骨细胞形态学观察

2Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞

3 受力后软骨细胞在光镜下的形态学改变

4 Bax、Bcl-2和 caspase-12基因相对表达量检测结果

5 Caspase-12蛋白表达检测情况

6 ROS含量检测结果

7软骨细胞凋亡率检测情况

讨论

结论

参考文献

综述:软骨细胞凋亡在骨性关节炎中的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢