黄芩素通过EGFR/Akt信号通路抑制由hEGF诱导的神经胶质瘤细胞的增殖和迁移

摘要

目的:
　　1.观察黄芩素（baicalein, BAI）对神经胶质瘤细胞U251增殖和迁移的抑制作用以及其对蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响；
　　2.探讨黄芩素对神经胶质瘤细胞U251的作用机制及其临床意义。
　　方法：
　　1.采用CCK法检测表皮生长因子（human epidermal growth factor, hEGF）（20 ng/ml）、EGFR抑制剂—AG1478（10μM）单独和联合在不同作用时间（12 h、24 h、36 h和48 h）条件下对神经胶质瘤细胞U251增殖活性的影响；
　　2.采用细胞划痕实验检测hEGF（20 ng/ml）、EGFR抑制剂—AG1478（10μM）单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251迁移的影响；
　　3.采用Western blot检测hEGF（20 ng/ml）、EGFR抑制剂—AG1478（10μM）单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251中蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响；
　　4.采用CCK法检测不同浓度黄芩素（20μM、40μM和80μM）、hEGF（20 ng/ml）单独和联合在不同作用时间（12 h、24 h、36 h和48 h）条件下对神经胶质瘤细胞U251增殖的影响；
　　5.采用细胞划痕实验检测不同浓度黄芩素（20μM、40μM和80μM）、hEGF（20 ng/ml）单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251迁移的影响；
　　6.采用Western blot检测不同浓度黄芩素（10μM、20μM、40μM和80μM）、hEGF（20 ng/ml）单独和联合在不同作用时间（6 h、12 h、24 h和36 h）条件下对蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响；
　　7.采用免疫荧光技术检测黄芩素（80μM）、hEGF（20 ng/ml）单独和联合作用24 h后对神经胶质瘤细胞U251中蛋白EGFR和Akt磷酸化的影响。
　　结果：
　　1. hEGF（20 ng/ml）作用U251细胞24 h后，明显促进细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化；
　　2. hEGF（20 ng/ml）作用U251细胞不同时间（12 h、24 h、36h和48h）后对细胞的增殖具有明显促进作用，时间越长，促进作用越显著；
　　3. hEGF（20 ng/ml）作用U251细胞24 h后对细胞的迁移具有明显促进作用；
　　4.不同浓度黄芩素（10μM、20μM、40μM和80μM）作用U251细胞24 h后，明显抑制U251细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化，并且阻断了hEGF对其的促进作用，浓度越高，抑制作用越明显；
　　5.相同浓度黄芩素（80μM）作用U251细胞不同时间（6 h、12 h、24 h和36 h）后，明显抑制U251细胞中蛋白EGFR和Akt的磷酸化，并且阻断了hEGF对其的促进作用，作用时间越长，抑制作用越明显；
　　6.不同浓度黄芩素（20μM、40μM和80μM）作用U251细胞不同时间（12 h、24 h、36 h和48 h）后，明显抑制U251细胞的增殖并且阻断了hEGF诱导的细胞增殖作用，浓度越高，作用时间越长，抑制作用越明显；
　　7.不同浓度黄芩素（20μM、40μM和80μM）作用U251细胞24 h后，明显抑制U251细胞的迁移并阻断了hEGF诱导的细胞迁移作用，作用时间越长，抑制作用越明显；
　　结论：
　　1. hEGF通过EGFR/Akt信号通路促进U251细胞的增殖和迁移；
　　2.黄芩素通过EGFR/Akt信号通路抑制由hEGF诱导的U251细胞的增殖和迁移。

目录

引言

材料与方法

1 实验细胞

2 药物和试剂

3 实验仪器和设备

4 细胞培养

5 CCK检测药物对神经胶质瘤细胞U251增殖的影响

6 细胞划痕实验检测药物对神经胶质瘤细胞U251迁移的影响

7 Western bolt检测神经胶质瘤细胞U251中EGFR和Akt蛋白的磷酸化

8 免疫荧光检测神经胶质瘤细胞U251中EGFR和Akt蛋白的磷酸化

9 统计学分析

结果

1 hEGF通过EGFR/Akt信号通路促进U251细胞的增殖和迁移

2 黄芩素通过EGFR/Akt信号通路抑制U251细胞的增殖和迁移

讨论

结论

参考文献

综述:中药单体抗神经胶质瘤作用机制研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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