甲基化抑制剂联合辛伐他汀对人骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖、凋亡的影响

摘要

目的:
　　实验主要探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)与羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂辛伐他汀(simvastatin，Sim)单药或联合对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖与凋亡的影响。
　　方法:
　　单独或联合应用DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷及羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂辛伐他汀处理对数生长期的人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞,采用CCK-8方法检测细胞增殖抑制率，Annexin-V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡的变化，蛋白质印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白 caspase-3、增殖蛋白c-myc的表达变化。实验分组：5-氮杂-2’-脱氧胞苷组：0.5μmol/L、2μmol/L、5μmol/L；辛伐他汀组：1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L；5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合辛伐他汀组：0.5μmol/L5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L的辛伐他汀；对照组：不加任何药物。统计学分析采用SPSS18.0统计软件分析结果;各组实验数据以?x±s表示，使用t检验比较实验各组与对照组之间差异，单因素方差分析统计实验各组的组间差异P＜0.05表示差异有统计学意义,P＜0.01表示差异有非常显著统计学意义。
　　结果:
　　（1）CCK-8实验结果显示不同浓度的DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷或羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀明显抑制RPMI8226细胞的增殖(P＜0.01)并呈浓度依赖性，DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀具有协同抑制细胞增殖的作用；
　　(2)Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡，结果发现不同浓度的 DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷或羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀明显诱导人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞凋亡(P＜0.05)并具有浓度依赖性，DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀具有协同诱导细胞凋亡的作用；
　　(3)蛋白质印迹法(Western blot)方法检测凋亡相关蛋白caspase-3及增殖蛋白c-myc，结果显示不同浓度的DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷或羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀明显诱导人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达增加及增值蛋白c-myc表达降低(P＜0.01)，并具有一定浓度依赖性，DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀用药作用更明显。
　　结论:
　　DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷及羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀对人多发性骨髓瘤系RPM8226细胞具有明显的细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用，并且与凋亡相关蛋白caspase-3表达活化增加和增值蛋白c-myc表达下调一致，并且具有一定的浓度依赖性，DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷与羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀联合用药作用更加显著。这些结果提示DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷与羟甲基戊二酸单酰辅酶A辛伐他汀可能具有协同抗骨髓瘤的作用。

目录

引言

材料与方法

1 材料

1.1 主要试剂

1.2 主要仪器与材料

1.3 实验相关工作液配制

2方法

2.1细胞培养

2.2实验分组

2.3 CCK-8法检测细胞增殖

2.4 Annexin-V/PI双染法流式胞术检测细胞调亡

2.5 Western blot检测各组caspase-3和c-myc蛋白表达

2.6 统计学分析

结果

1 辛伐他汀和5-氮杂-2'-脱氧胞苷单独或联合对RPMI8226细胞增殖的影响

2 辛伐他汀和5-氮杂-2'-脱氧胞苷单独或联合对RPMI8226细胞凋亡的影响

3 辛伐他汀和5-氮杂-2'-脱氧胞苷单独或联合对RPMI8226细胞caspase-3和c-myc蛋白质表达的影响

讨论

展望及结语

结论

参考文献

综述：DNA甲基化抑制剂与HMG-COA还原酶抑制剂治疗MM的最新研究进展

致谢

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