阴茎海绵体注射基质血管组分改善Ⅰ型糖尿病小鼠勃起功能的研究

摘要

研究目的：通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立糖尿病性勃起功能障碍小鼠模型，用电刺激阴茎海绵体神经方法检测实验小鼠勃起时阴茎海绵体内压力值的变化，评估阴茎勃起功能。探究单次阴茎海绵体内注射基质血管组分（SVF）治疗糖尿病小鼠勃起功能障碍的疗效及作用机制。
　　研究方法：8周龄C57BL6J雄性小鼠随机分为4组：正常对照（Normal）组、糖尿病未治疗（No treatment）组、海绵体内注射 PBS（DM+PBS）组和海绵体内注射 SVF（DM+SVF）组。正常实验小鼠通过低剂量（50mg/kg/d）连续5天腹腔注射链脲佐菌素，诱导建立Ⅰ型糖尿病（DM）小鼠模型，根据体重及血糖值筛选出糖尿病小鼠，在DM小鼠建模8W后，勃起力测定技术证实DM小鼠并发勃起功能障碍，成功构建糖尿病性勃起功能障碍小鼠模型，Normal组和No treatment不做任何治疗处理，PBS组和SVF组阴茎海绵体内分别一次性注射20ul的1xPBS和新鲜分离提取自 eGFP小鼠附睾脂肪组织的 SVF细胞（1x105cells/20ul）。局部注射2W后，在动物活体实验中，通过电刺激小鼠阴茎海绵体神经，记录海绵体组织勃起时的内压（ICP），记录电刺激之前小鼠的系统血压（MSBP），使用 ICP/MBSP评估小鼠的勃起功能。处死小鼠后，立即获取阴茎海绵体组织，进行分子生物学实验，通过免疫荧光染色技术检小鼠测海绵体内 VEGF-A、PH3、CD31和 p-eNos的表达水平变化，通过ELISA方法检测小鼠海绵体组织内cGMP浓度变化。
　　结果：糖尿病小鼠的勃起功能显著低于正常小鼠（P＜0.05），局部阴茎海绵体内注射治疗2W后，SVF组糖尿病小鼠的勃起功能显著改善，ICP/MBSP比值明显高于 No treatment组和 PBS组（P＜0.05）。SVF增加糖尿病小鼠海绵体内VEGF-A的表达，SVF诱导糖尿病小鼠海绵体血管内皮细胞增殖，SVF融合到糖尿病小鼠海绵体内皮细胞诱导分化，SVF增加糖尿病小鼠海绵体内皮细胞含量，SVF增加糖尿病小鼠海绵体内 eNos磷酸化表达水平，SVF增加糖尿病小鼠海绵体内cGMP浓度。SVF组阴茎海绵体内 VEGF-A、PH3、CD31、p-eNos的表达水平和cGMP浓度明显高于DM组和PBS组（P＜0.05）。
　　结论及意义：阴茎海绵体组织内注射 SVF增加海绵体内血管生长因子的表达或融合宿主内皮细胞诱导分化增殖，使阴茎血管内皮细胞再生，通过恢复和增强内源性 NO-cGMP途径改善糖尿病小鼠的勃起功能，为临床治疗糖尿病性勃起功能障碍疾病提供了一定的基础支持。

目录

引言

第一部分 糖尿病小鼠模型建立及电刺激法在糖尿病勃起功能障碍小鼠中的应用

研究对象与方法

1实验动物及试剂

2 糖尿病小鼠模型建立

3 电刺激法检测糖尿病小鼠的勃起功能

4统计学处理：

结果

1 STZ可以诱导C57小鼠建立糖尿病模型：

2电刺激法用于糖尿病小鼠勃起功能的检测：

讨论

第二部分 海绵体注射SVF改善Ⅰ型糖尿病勃起功能的研究

研究对象与方法

1实验动物及试剂

2消化法提取新鲜SVF细胞

3海绵体注射SVF治疗Ⅰ型糖尿病性勃起功能障碍

4免疫组织化学方法

5 ELISA法测定cGMP浓度：

6统计学处理：

结果

1小鼠代谢及生理变量变化：

2 SVF显著改善糖尿病小鼠的勃起功能：

讨论

结论

参考文献

综述:糖尿病性勃起功能障碍中血管因素发病机制的研究

攻读学位期间的研究成果

附录：缩略语

致谢

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