280nmLED-紫外线应用于皮瓣缺血再灌注损伤后治疗的实验研究

摘要

目的:
　　通过应用280nmLED(Light Emitting Diode,LED发光二极管)紫外线在大鼠腹部皮瓣产生缺血再灌注损伤后对大鼠腹部术区进行局部照射，来观察280nmLED紫外线对大鼠皮瓣再灌注损伤后组织的治疗效果，并就相应的实验组和对照组所产生的结果来探讨其相关及可能的作用机制。
　　方法:
　　将同一批在相同环境下长成的 Wistar健康雄性鼠共40只，随机分4组，280nm、320nm的实验组各1组，空白组1组，10只一组，剩下的10只则可作为同批次相同环境下成长的替补组大鼠，防止实验中的大鼠因意外造成皮瓣损伤影响到实验结果或死去造成实验结果缺失的，为保证实验的正常进行，选择替补大鼠按照相应的实验方法继续完成实验。手术及替补组大鼠在实验正式开始前均养于SPF动物实验室1w，并于术前1d禁食；10%水合氯醛腹腔麻醉行腹部皮瓣模型制作手术，在所有实验及空白组大鼠腹部皮肤建立再灌注损伤皮瓣的模型后，对于280nm和320nm两个实验组大鼠模型建成后即立刻行对应的人工紫外线术区皮瓣照射1次，时间为持续4 min，后持续单笼饲养，正常饲养进食，直至取标本处死；从术后第1天开始每天按时按量对两个实验组的腹部皮瓣进行相应波长的紫外线照射，2次/1d，每次4 min,共8min，持续7 d；对于空白组大鼠其皮瓣模型制备成功后，不予任何处理措施，等空白组鼠完全从麻醉中醒后给予单笼正常饲养进食；术后每天进行观察，若出现大鼠啃食皮瓣致皮瓣毁损影响结果的，及时按相同实验方法进行相应组的实验进行替补大鼠实验；三组实验鼠都在术后7d时候通过坐标贴纸的方法来测算腹部手术区域皮瓣的成活面积同时计算相应皮瓣的成活率；手术后7d给予各组大鼠处死，并在各组大鼠的腹部相应术区相应的位置，切取皮瓣组织并立即相应处理制作成病理切片再行免疫组织化学染色，后通过显微镜及 Image-Pro Plus6.0测算阳性血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)的表达面积以及所占百分比，使用 TUNEL实验方法检测组织标本中细胞中的凋亡比率，通过 SPSS软件对数据进行处理，获取结果。
　　结果:
　　280nm,320nm和空白三组术后7 d皮瓣的成活率检测分别为62.38%±8.64%、54.49%±4.48%和39.61%±4.22%，对应的组织中 VEGF阳性表数据分别为91.39%±9.29%、70.46%±4.02%和34.97%±3.08%，对应分组皮瓣组织中细胞凋亡率显示为53.06%±5.64%、64.72%±3.73%和32.82%±1.72%。所有的实验的对应数据指标中，280nm、320nm和对照组相比，P＜0.05；280nm和320nm两实验组比较，P＜0.05。
　　结论:
　　280nmLED-紫外线局部照射治疗大鼠腹部皮瓣缺血再灌注后损伤效果明显，作用机制与皮瓣中 VEGF表达量的提高促进毛细血管新生而对组织的成活有积极作用；经紫外线照射的皮瓣组织细胞凋亡率升高，且紫外线波长较短照射组细胞凋亡情况较轻，此现象可能与皮肤对不同波长紫外线的吸收情况不同以及它们自身波长穿透性强弱的特性有关。

目录

引言

材料与方法

材料

1.1实验动物

1.2主要检测仪器设备

1.3主要试剂及耗材

1.4常用试剂的制备

1.2实验方法

2.1 LED紫外线灯的制作

2.2制作大鼠腹部皮瓣缺血再灌注后损伤模型

2.3局部照射LED紫外线

2.4皮瓣观察

2.5皮瓣组织VEGF检测

2.6皮瓣组织细胞凋亡检测

2.7统计分析

实验结果

1 LED紫外线对皮瓣恢复期作用情况

2皮瓣成活率情况

3 皮瓣组织VEGF检测结果

4皮瓣组织细胞凋亡检测结果

讨论

结论

参考文献

综述:紫外线的生物学作用及其医学应用

攻读学位期间的研究成果

致谢

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