胡黄连苷Ⅱ抑制线粒体细胞色素C信号通路发挥神经保护作用

摘要

目的：急性脑血管疾病的发病率呈现出逐渐上升趋势，然其发病机制尚不十分清楚，因而缺乏相应的有效治疗措施。本文旨在探讨胡黄连苷II通过作用于线粒体细胞色素C（CytC）信号通路对脑缺血/再灌注损伤发挥神经保护作用的机制。
　　方法：成年健康雄性Wistar大鼠128只，按随机数字表法分为假手术组、模型组、胡黄连苷II组、抑制剂组、抑制剂+胡黄连苷II组、激动剂组、激动剂+胡黄连苷II组、溶媒（DMSO）组。实验选用CytC选择性激动剂苍术苷（Atr）和特异性抑制剂环孢素（CsA）作为工具药，胡黄连苷II作为治疗药物，采用改良Longa线栓法制备大鼠脑缺血2h/再灌注24h模型。大鼠脑缺血/再灌注24h后行改良神经功能学评分（mNSS）；TTC染色法检测大鼠脑梗死体积；HE染色法检测大鼠神经细胞损伤情况；原位末端标记方法（TUNEL）检测缺血/再灌注损伤后大鼠皮质区神经细胞凋亡的情况；电镜观察线粒体超微结构变化；ELISA法检测大鼠缺血区脑组织活性氧（ROS）的含量；免疫组织化学法和Western blot法检测再灌注损伤区CytC、Caspase-9和Caspase-3的蛋白表达水平。
　　结果：与假手术组相比，模型组大鼠脑缺血/再灌注损伤后呈现出改良神经功能学评分升高，TTC染色示梗死区面积较明显，HE结果显示大鼠脑神经细胞损伤程度比较严重，TUNEL结果显示神经细胞凋亡数量增加，线粒体结构破坏严重，ELISA法结果显示大鼠脑组织中ROS含量升高；免疫组织化学和Western blot结果显示CytC、Caspase-9和Caspase-3的蛋白表达量均较假手术组升高（P＜0.05）。与模型组相比，胡黄连苷II组大鼠mNSS神经学评分及脑梗死体积降低，HE结果显示大鼠脑神经细胞损伤程度有所减轻，TUNEL结果示神经细胞凋亡数量减少，线粒体损伤减轻，脑组织中ROS含量下降；免疫组织化学和Western blot结果显示CytC、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量均较模型组显著降低（P＜0.05）。CsA组与胡黄连苷II组相比，CsA组脑组织ROS含量较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。余组相比未见统计学差异（P＞0.05）。
　　结论：胡黄连苷II对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠产生神经保护的作用机制，可能与清除过量活性氧、保护线粒体结构以及下调CytC、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量有关。

目录

引言

材料和方法

1材 料

2方 法

结果

1胡黄连苷II对大鼠神经功能学评分的影响

2胡黄连苷II对大鼠脑梗死体积的影响

3胡黄连苷II对大鼠病理形态学的影响

4胡黄连苷II对大鼠神经细胞凋亡的影响

5胡黄连苷II对大鼠神经细胞线粒体结构的影响

6 ELISA法检测胡黄连苷II对大鼠ROS含量的影响

7免疫组化检测胡黄连苷II对大鼠CytC、Caspase-9和Caspase-3的影响

8 Western blot检测胡黄连苷II对大鼠CytC、Caspase-9和Caspase-3的影响

讨论

结论

参考文献

综述：急性缺血性脑血管病的氧化损伤机制

攻读学位期间的研究成果

致谢

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