马铃薯匍匐茎发生特异表达基因分离及调控转化株系获得

摘要

近几年来，植物器官发育基因的分离克隆、基因功能、表达模式等方面的研究取得了显著进展。但大多数的研究只是从单基因切入，研究其在器官发育中的功能，并对其可能所在的调控网络定位。目前，植物器官发育的分子生物学研究、尤其是基因如何精细调控器官发生研究仍在其初期。
　　 本研究利用RACE技术分离获得匍匐茎特异表达EST N4S7和S36所在基因的目的长cDNA，并对其功能进行生物信息学分析;体外表达目的cDNA，明确了其对原核细胞生长的影响;构建了目的cDNA体内转化载体，并转化目的cDNA于体内，获得了PCR阳性转化株系，为明确目的cDNA在匍匐茎形成中的相关功能奠定基础。研究结果如下：⑴获得了3个匍匐茎特异表达cDNA W2、W3-2和W3。BLAST检索发现，W2 cDNA序列与烟草线粒体假定蛋白(NitaMp075)编码cDNA序列有100％的相似性，推测W2编码匍匐茎线粒体内的NADH脱氢酶亚基4;W3-2与大豆ataxin-3 cDNA序列有77％的相似性，推测该基因编码匍匐茎ataxin-3蛋白;W3与马铃薯DnaJ-like蛋白有95％的相似性。⑵用分离获得的2个全长cDNA，构建重组表达质粒pET-28c-W2和pET-28c-W3-2，并转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)，构建了相应的重组菌株。测定对照pET-28c和W2、W3-2重组菌的不同培养时间的OD600值，结果表明在加入IPTG以后，不同菌株的OD600值没有显著差异，推测目的蛋白的表达对重组菌的生长没有产生影响。⑶用分离获得的3个全长cDNA，分别构建了其过表达和抑制表达的植物转化载体，通过农杆菌介导途径将W2、W3-2和W3正义和反义cDNA导入到了马铃薯体内，获得了3株W2正义和1株W2反义的阳性转化株系。

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摘要

第一章 引言

1．1 植物器官发生研究进展

1．2 器官发生相关基因的分离方法

1．3 本研究的目的和意义

1．4 研究内容及技术路线

第二章 目的cDNA的分离及序列分析

2．1 实验材料与试剂

2．2 实验方法

2．3 结果

2．4 讨论

第三章 W2、W3-2在E．coli表达对其生长的影响

3．1 实验材料

3．2 实验方法

3．3 实验结果

3．4 讨论

第四章 W2、W3-2和W3真核表达研究

4．1 材料与试剂

4．2 实验方法

4．3 结果

4．4 讨论

第五章 结论

5．1 目的cDNA的分离

5．2 W2和W3-2在E．coli表达对其生长的影响

5．3 W2、W3-2和W3的真核表达研究

参考文献

附录

致谢

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