抗组胺药盐酸非索非那定体外方法学及药物动力学研究

摘要

一、盐酸非索非那定体外分析方法的建立 建立了高效液相色谱一紫外法测定盐酸非索非那定片含量和有关物质的方法。采用Diamonsil C<,18>(200mm×4.6mm，5μn)柱，水(含0.4％磷酸，0.7％三乙胺)一乙腈一甲醇(50：40：10 v/v/v)，磷酸调pH=3.0为流动相，检测波长210nm，柱温35℃，进样量20μL。以替米沙坦为内标计算盐酸非索非那定片的含量，结果盐酸非索非那定在1.0～20.0mg·L<'-1>浓度范围内线性关系良好(r=0.9998)，方法专属性强，精密度良好，平均回收率100.5％。测定3批盐酸非索非那定片标示百分含量为93.0％，92.9％，93.8％。采用不加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸非索非那定片有关物质，最低检出限为5.0μg·L<'-1>。 二、盐酸非索非那定大鼠体内药动学研究 建立高效液相色谱一荧光检测法测定大鼠血浆和组织中盐酸非索非那定浓度的方法。采用Diamonsil C<,18>(200×4.6 mm，5μm)柱，水(含0.4％磷酸，0.7％三乙胺)-乙腈-甲醇(55：35：10 v/v/v)，磷酸调pn=3.0为流动相，检测波长λ<,ex>=230nm，λ<,em>=280nm，柱温35℃。生物样品预处理采用乙腈沉蛋白，每一分析批随行标准曲线计算浓度，大鼠血浆中盐酸非索非那定在0.05～4.0mg·L<'-1>浓度范围内线性关系良好(r=0.9993)，低、中、高3个浓度质控样品的批内精密度分别为13％，8.5％和4.8％，批间精密度分别为15％，14％和9.2％，准确度分别为99.0％，96.2％和98.7％，提取回收率在60％以上。肝中盐酸非索非那定在0.1～10.0μg·g<'-1>浓度范围内线性关系良好(r=0.9951)，低、中、高3个浓度质控样品的批内精密度分别为9.2％，11％和7.3％，批间精密度分别为14％，15％和11％，准确度分别为97.3％，101.8％和108.3％，提取回收率在50％以上。 健康雄性大鼠以15，30，60mg/kg剂量灌胃给予盐酸非索非那定后，血浆浓度在1.67～2.33h内达峰，T<,max>与给药剂量无关。达峰浓度C<,max>分别为0.60±0.18，1.02±0.29，1.88±0.37mg·L<'-1<，AUC<,0-t>分别为4.62±0.99，8.78±1.98，16.51±3.01mg·h·L<'-1>，3个剂量组C<,max>、AUC<.0-t>与给药剂量的比值方差分析结果表明3组比值无显著性差异(P>0.05)，符合线性动力学特征。 盐酸非索非那定在大鼠体内分布广泛，药物进入血液后迅速分布于脏器组织中，其中小肠、胃中含量最高，小肠中的含量是血浆的27～33倍，胃中的含量是血浆的24～27倍，其次分布在肝、肾、脾、肺、心等组织，其含量分别为血浆中的3～4倍，0.6～1.1倍，0.6～1.0倍，0.6～0.9倍，0.4～0.6倍。脑中只有微量，AUC<,脑>与AUC<,血浆>的比值在0.06～0.10之间，表明药物不易通过血脑屏障。盐酸非索非那定在胃、小肠达峰最快，分别为0.67～0.83h，1.17～1.33h。其次在肝、肺、脑、心、脾，肾内达峰。达峰浓度依次为小肠、胃>肝>肾、心、肺>脾>脑，并且随剂量的增加而增大，小肠、胃组织达峰浓度是血浆达峰浓度的30～50倍，肝组织达峰浓度是血浆达峰浓度的2～3倍。胃、小肠、肝、肺、心、脾、肾的C<,max>和AUC<,0-t>与剂量线性相关(P<0.05)，3个剂量组与给药剂量比值的方差结果表明3组比值无显著性差异(P>0.05)，符合线性动力学特征。胃、小肠、肺、脑、心、脾组织中药物消除半衰期均较血浆的消除半衰期短，肝、肾组织中药物消除半衰期较血浆的消除半衰期稍长。健康雌性大鼠以30mg/kg剂量灌胃给予盐酸非索非那定后，血浆中T<,max>为2.33±0.58h，达峰浓度C<,max>为0.95±0.13mg·L<'-1>，AUC<,0-t>为11.92±2.62mg·h·L<'-1>，消除半衰期t<,1/2>为14.82±2.96h，Vd/F为9.05±2.05L，Cl/F为0.46±0.12L·h<'-1>。雌性大鼠的清除率和表观分布容积比雄性大鼠低30％。雄性与雌性大鼠血浆中的C<,max>和AUC<,0-t>经方差分析结果表明雌雄无显著性差异(P>0.05)。盐酸非索非那定在雌性大鼠胃、肠中分布广泛，其次为肝、肾、脾、肺、心、脑，达峰时间依次为胃、小肠、脑、心、肺、脾、肾、肝。胃、小肠组织的达峰浓度最高，是血浆中C<,max>的40～50倍。其次为肝、肾、心、肺、脾、脑。各组织的C<,max>，AUC<,0-t>与雄性大鼠相应药动学参数经方差分析结果表明雌雄大鼠在肾组织的C <,max>有显著性差异，其他均无显著性差异。 采用平衡透析法测定盐酸非索非那定血浆蛋白结合率，HPLC-荧光法测定血浆与磷酸盐缓冲液中的药物浓度，样品在冷藏放置72h后透析袋内外的游离药物达到动态平衡，血浆浓度在0.5、1、2mg·L<'-1>的蛋白结合率在50％以上。 三、盐酸非索非那定人体药动学和生物利用度研究 建立高效液相色谱一荧光检测法测定人血浆中盐酸非索非那定浓度的方法，采用Diamonsil C<,18>(200×4.6 mm，5μm)柱，水(含0.4％磷酸，0.7％三乙胺)一乙腈一甲醇(55：35：10v/v/v)磷酸调pH=3.0为流动相，替米沙坦为内标，检测波长λ<,ex>=230nm，λ<,em>=280nm，柱温35℃。血浆样品预处理采用液．液萃取法，每一分析批随行标准曲线计算浓度，人血浆中盐酸非索非那定在5.0～500.0μg·L<'-1>浓度范围内线性关系良好(r=0.9996)，定量下限为5.0μg·L<'-1>。低、中、高三个浓度质控样品的日内精密度分别为4.3％，4.6％和4.0％，日间精密度分别为9.2％，8.1％和7.7％，准确度分别为101.6％，103.7％和104.5％，提取回收率在80％以上。 采用双周期自身交叉试验，20名健康受试者口服盐酸非索非那定受试制剂和参比制剂120mg后，血浆中盐酸非索非那定T<,max>分别为2.55±0.72和2.60±0.84h，C<,max>分别为370.8±84.7和354.5±88.3μg·L<'-1>，t<,1/2>分别为5.34±1.15和5.62±1.23h，Cl/F分别为．51.0±8.1和53.8±9.4L·h<'-1>；Vd/F分别为390.6±96.8和438.4±122．4L；MRT<,0-1>分别为6.61±0.82和656±0.87h，采用梯形法计算，AUC<,0-t>分别为2290.1±368.1和2159.5±372.8μg·h·L<'-1>，以AUC<,0-1>计算，盐酸非索非那定胶囊的相对生物利用度平均为107.6±17.3％。两种制剂中盐酸非索非那定C<,max>、AUC<,0-t>和AUC<,0-∞>经方差分析和双单测t检验和(1-2a)置信区间检验结果表明，受试制剂C<,max>的90％N信限在参比制剂的70～143％之内，受试制剂AUC<,0-t>和AUC<,0-∞>值的90％可信限在参比制剂的80～125％之内，因此两制剂体内生物作用等效。

目录

声明

第一章 前言

1.1药代动力学研究的意义

1.2抗组胺药物的研究进展和意义

1.3盐酸非索非那定的研究概况

1.4研究内容及意义

第二章 盐酸非索非那定片含量测定的方法学研究

2.1药品、试剂和仪器

2.2含量测定

2.4小结与讨论

第三章 盐酸非索非那定大鼠体内药物动力学研究

3.1药品、试剂、食品和实验动物

3.2盐酸非索非那定生物样品分析方法的建立

3.3给药方案与样品采集

3.4盐酸非索非那定大鼠体内药物动力学研究

3.5小结与讨论

4.1药品、试剂和仪器

4.2盐酸非索非那定血浆样品分析方法的建立

4.3试验设计与给药方案

4.4盐酸非索那定胶囊人体相对生物利用度研究

4.5小结与讨论

第五章 全文总结

参考文献

致谢

个人简历