转基因草莓向栽培草莓中转移CBF1基因的研究

摘要

本实验于2004年9月-2007年3月在北京市农林科学院林业果树研究所进行。以“丰香”、“土特拉”、“达斯莱克特”、“童子l号”、“枥乙女”为母本，以转CBFl基因的“哈尼”转基因株系80、83、94、104、10-5-5为父本，获得以下主要结果： 1 不同质量浓度的卡那霉素对种子的萌发影响不大，但对其生长发育具有明显的抑制作用，随着质量浓度的增加，其抑制作用加强。获得的筛选培养基为MS+Km25mg／L。 2 经过卡那霉素筛选出的阳性植株经PCR检测，证明外源基因CBFl通过有性杂交可以从转基因植株当中转移到普通的栽培品种当中。Southern杂交也再一次更加有力的说明外源基因CBFl通过有性杂交进入到了栽培品种的基因组中。 3 获得的转育成功的材料有TY-83-丰香，TY-80-土特拉，TY-104-达斯莱克特，TY-94-达斯莱克特，共计有16个株系。 4 电导法测定叶片的抗寒性，在各个温度处理下，转育成功的植株的电导率均低于未经过转育的植株。在-20℃时转育成功的植株的电导率有一个跃升，表明质膜在此温度范围内受损严重，而未经过转育的植株在-16℃时的电导率就明显增加，表明转CBFl基因植株抗寒性有所提高。 5 生长恢复实验测定植株的抗寒性，结果发现，对照有57.7％出现萎蔫受冻现象，而转育植株有35.6％出现萎蔫受冻现象。低温处理结束后于22℃～25℃进行恢复生长，对照有51.9％生长正常，而转育植株有73.2％生长正常，说明转育植株的抗寒性较对照植株有所提高，CBFl基因在转育的草莓中得到了表达。 6 细胞胞间结冰温度测定植株的抗寒性，转育植株的细胞胞间结冰温度在-6.1l℃，而未转育的对照植株的细胞胞间结冰温度在-4.15~C，转育植株的细胞胞间结冰温度比未经转育的对照植株低1.96℃，试验结果说明转育植株的抗寒性提高了，CBFl基因在转育的草莓中得到了表达。

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文摘

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论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1植物抗寒基因工程及转录因子CBF1

1.1.1植物抗寒基因工程

1.1.2转录因子CBF1

1.2本研究的的目的意义

1.2.1草莓遗传转化研究进展

1.2.2草莓遗传转化所涉及的基因

1.2.3杂交转育研究进展

2材料与方法

2.1材料

2.1.1供试材料

2.1.2菌株

2.1.3培养基

2.1.4植物基因组DNA提取缓冲液

2.1.5质粒DNA提取缓冲液

2.1.6电泳缓冲液

2.1.7 Southern杂交所需要的药品

2.2方法

2.2.1筛选培养基的确定

2.2.2转育材料的获得

2.2.3种子的抗性筛选

2.2.4抗性植株的扩繁及生根

2.2.5转育材料的移栽

2.2.6植物基因组DNA的提取(CTAB法)

2.2.7菌液的制备

2.2.8质粒DNA的少量制备

2.2.9 PCR扩增

2.2.10电泳检测

2.2.11 Southern杂交（采用Roche公司DIG High Prime DNA Detection Kit）

2.2.12转育植株的抗寒性生理指标的鉴定

3结果与分析

3.1筛选培养基中卡那霉素浓度的确定

3.2杂交转育后代的筛选

3.3抗性后代的PGR检测

3.4 Southern杂交

3.5转育植株的抗寒性生理指标的鉴定

3.5.1电导法测定叶片的抗寒性

3.5.2生长恢复实验测定植株的抗寒性

3.5.3细胞胞间结冰温度测定植株的抗寒性

4讨论

5结论

致谢

参考文献

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