我国三个地方鸡品种体外培养细胞主要遗传学特性研究

摘要

本文对我国三个地方鸡品种体外培养细胞主要遗传学特性进行了研究。主要内容如下： 1.采用组织块贴壁培养法，对白耳鸡、文昌鸡和中国斗鸡8日龄胚胎进行初代和传代培养，成功建立了三个鸡品种成纤维细胞系。冻存样本含量分别达57、53及43个；分别冻存了322、237及258份细胞；每份含有1.52×107、2.67×107及3.41×107个细胞/ml。 2.通过传代培养细胞染色体显示法，制备了染色体中期分裂相标本。分析结果表明：2n染色体数目在白耳鸡、文昌鸡及中国斗鸡中分别占86％、92％及89％，所建立的细胞系为稳定二倍体细胞系。 3.采用低离子强度聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析了LDH、NIDH同工酶酶谱。结果表明：三种鸡细胞LDH同工酶均出现清晰的4条酶谱，从负极到正极依次为LDH<,1>、LDH<,2>、LDH<,3>及LDH<,4>。 4.将6μ1脂质体介导2μg重组质粒pEGFP-C1转染文昌鸡细胞48h可获得较满意的转染效率，为最佳优化组合。

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论文说明：图表目录，缩略语表

声明

1引言

1.1家禽遗传资源多样性保存研究

1.1.1国内外家禽遗传种质资源面临的危机

1.1.2家禽遗传种质资源保存技术

1.2鸡染色体核型研究

1.2.1国内外鸡染色体核型研究简史

1.2.2鸡染色体数目和正常核型

1.2.3鸡的性染色体

1.2.4染色体核型命名

1.2.5染色体核型的应用

1.3鸡同工酶研究

1.3.1同工酶研究简史

1.3.2同工酶的概念及命名

1.3.3同工酶的基因基础

1.3.4同工酶的分析方法

1.3.5同工酶的应用

1.4荧光蛋白标记基因在鸡体外培养细胞中的表达研究

1.4.1荧光蛋白标记基因及其突变体

1.4.2荧光蛋白基因的应用

1.5本试验的目的与意义

2试验材料与方法

2.1试验材料

2.1.1细胞来源

2.1.2主要仪器设备

2.1.3试剂及配制

2.2试验方法

2.2.1染色体标本的制备

2.2.2染色体核型分析

2.2.3同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.2.4质粒DNA的制备及鉴定

2.2.5脂质体介导的质粒DNA转染体外培养细胞

2.2.6荧光蛋白基因表达效率的统计

2.2.7转染细胞形态观察

3试验结果

3.1三个地方鸡品种成纤维细胞系的建立

3.2染色体核型分析

3.2.1二倍体(2n)染色体细胞数目

3.2.2核型和染色体数目

3.2.3染色体形态

3.3同工酶分析

3.3.1同工酶酶谱

3.3.2酶谱中的Rf值

3.4脂质体介导四种质粒DNA转染体外培养细胞

3.4.1质粒DNA的制备及鉴定

3.4.2转染条件的优化

3.4.3四种质粒DNA在三种鸡细胞中表达率的比较

3.4.4转染细胞形态观察

4分析与讨论

4.1关于鸡染色体标本制备技术

4.2关于秋水仙素的浓度和作用时间

4.3关于鸡染色体数目与形态

4.4关于鸡LDH和MDH同工酶酶谱

4.5关于影响转染效率的因素

4.6关于荧光蛋白基因在体外培养细胞中的表达

5结论

致谢

参考文献

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