骨形态发生蛋白（BMPs）基因mRNA在牛不同组织中表达的研究

摘要

骨形态发生蛋白(BMPs)是TGF-β超家族的重要成员之一，BMPs对雌性繁殖性能有重要作用，特别是对卵巢的作用尤为显著，能够调控颗粒细胞增殖和细胞分化，也对卵母细胞发育有作用。故对BMPs及其受体结构的分子克隆及在不同组织表达的分析，来确定BMPs及其受体在牛不同组织所起的作用，进而对从基因角度研究不孕或多胎的机制具有重要的现实意义。 本试验应用RT-PCR方法从蒙古牛卵巢组织中扩增获得BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4的部分基因序列；并通过半定量RT-PCR分析了BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因mRNA在蒙古牛不同组织中的表达情况。方法：(1)在Genbank中查找人、小鼠和羊的BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因序列设计引物；提取牛卵巢总RNA，分别采用RT-PCR技术扩增牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4的部分序列，将此片段重组到PMD18-T载体中，双酶切和PCR鉴定后测序。结果证实，所克隆的序列分别为牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4部分eDNA序列。(2)以β-actin为内参照物，应用RT-PCR方法检测BMPs在牛不同组织中可能的表达。结果显示，BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因mRNA均在卵巢、输卵管、子宫和肾脏组织中表达。凝胶电泳条带灰度分析的结果显示：牛BMP-15基因在卵巢和输卵管中高度表达；牛GDF-9基因在卵巢中高度表达，而在输卵管、子宫和肾脏中表达水平较低；牛BMPR-IB基因在卵巢和子宫中表达水平较高，在输卵管和肾脏中的表达水平低；牛BMP-4基因在卵巢中高度表达，在子宫中的表达量也相对较高，而在输卵管和肾脏中表达量不是很高。

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论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1骨形态发生蛋白(BMPs)及其受体的研究进展

1.1.1 BMPs的发展简史

1.1.2 BMPs及其受体的种类

1.1.3 BMPs及其受体的结构

1.1.4 BMPs及其受体的生物学功能

1.2 BMP-15的研究进展

1.3 GDF-9的研究进展

1.4 BMPR-IB的研究进展

1.5 BMP-4的研究进展

1.6半定量RT-PCR分析技术

1.7本研究的目的、意义及研究方法

2试验一：牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因的克隆

2.1试验材料

2.1.1菌株和克隆载体

2.1.2试验动物组织样

2.1.3主要仪器和设备

2.1.4主要试剂和溶液

2.2试验方法

2.2.1 PCR引物的设计及合成

2.2.2 RNA酶的灭活

2.2.3牛卵巢总RNA的提取

2.2.4反转录

2.2.5 PCR反应

2.2.6 DNA琼脂糖凝胶电泳

2.2.7 cDNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定

2.2.8 PCR产物的序列测定

2.2.9序列分析

2.3结果

2.3.1总RNA的提取结果

2.3.2 RT-PCR扩增结果

2.3.3扩增产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定

2.3.4 RT-PCR产物的测序及序列分析结果

3试验二：牛不同组织中BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4 mRNA的表达

3.1试验材料

3.1.1试验动物及其组织

3.1.2主要仪器和试剂

3.1.3 PCR引物的设计及合成

3.2试验方法

3.2.1总RNA的提取及检测

3.2.2半定量RT-PCR

3.2.3电泳及灰度分析

3.2.4数据分析

3.3结果

3.3.1总RNA的检测结果

3.3.2反应循环数的确定

3.3.3半定量RT-PCR分析

4讨论

4.1牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因的克隆

4.2半定量RT-PCR法的构建

4.3关于BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因的表达

4.4关于BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因表达的差异

5结论

致谢

参考文献

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