蒙古羊Hoxa11、Hoxd11和Hoxc8基因的克隆及序列分析

摘要

本研究以38只乌珠穆沁羊与22只苏尼特羊为研究对象，利用PCR技术，首次成功地克隆了绵羊的Hoxc8基因1673bp的片段，包括全部内含子和大部分外显子。同时也比对了乌珠穆沁羊与苏尼特羊的Hoxc8基因序列，实验结果表明：苏尼特羊Hoxc8基因序列第373处为C，而乌珠穆沁羊突变为T。苏尼特羊Hoxc8基因序列第576处为T，而乌珠穆沁羊Hoxc8基因序列中突变为A。苏尼特羊Hoxc8基因序列第655和656处为C和G，乌珠穆沁羊Hoxc8基因序列中突变为T和A。苏尼特羊Hoxc8基因序列第727处中A缺失。苏尼特羊Hoxc8基因序列第1031处为A，乌珠穆沁羊Hoxc8基因序列中突变为T。苏尼特羊Hoxc8基因序列第1566处为T，乌珠穆沁羊Hoxc8基因序列突变为C等七处不同。比对绵羊与几种动物的同源性时发现外显子有很高的同源性，且内含子中有四个部分是高度保守的，长度分别在20bp左右。 本实验同时比对了乌珠穆沁羊和苏尼特羊的Hoxall、Hoxdll和Hoxc8基因的部分外显子区域的核苷酸序列。比对结果表明：扩增出的Hoxall基因第二外显子大小为192bp片段，乌珠穆沁羊序列中有一个核苷酸的缺失和两个核苷酸的突变；扩增出的Hoxdll基因第二外显子的大小为151bp片段（GenBank登录号：GQ300854），乌珠穆沁羊序列中有一个核苷酸的突变；扩增出的Hoxc8基因第一外显子的大小为327bp片段，乌珠穆沁羊和苏尼特羊之间没有差异。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1绵羊品种资源简介

1.2同源异型盒基因的研究进展

1.2.1同源异型盒基因的发现

1.2.2同源异型盒基因的表达与调控

1.2.3同源异型盒基因的分类

1.2.4同源异型盒基因的结构

1 2.5同源异型盒基因的功能

1.2.6各种动物Hox基因的研究

1.3本研究的目的与意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1材料来源

2.1.2实验主要仪器设备

2.1.3主要试剂

2.1.4主要试剂和溶液的配制

2.2实验方法

2.2.1基因组DNA提取

2.2.2 PCR反应

2.2.3 PCR产物的回收(DNA凝胶回收试剂盒)

2.2.4连接反应

2.2.5转化反应

2.2.6重组质粒的PCR扩增鉴定

2.2.7测序

2.2.8向数据库提交基因序列

3结果与分析

3.1基因组DNA提取结果

3.2 PCR扩增目的基因片段

3.3蒙古羊Hoxc8基因PCR产物纯化结果

3.4乌珠穆沁羊和苏尼特羊与几种动物Homeobox基因的比对结果

3.4.1 Hoxa11基因的比对结果

3.4.2 Hoxd11基因的比对结果

3.4.3向数据库提交绵羊Hoxd11基因部分序列

3.4.4 Hoxc8基因片段(327bp)的比对结果

3.4.5乌珠穆沁羊和苏尼特羊Hoxc8基因的克隆测序结果

3.4.6绵羊与几种动物的比对结果

3.4.7乌珠穆沁羊和苏尼特羊的比对结果

4讨论

4.1影响PCR反应扩增成功率的主要因素

4.1.1高质量DNA的提取与改进

4.1.2引物的选择

4.1.3 PCR反应条件

4.2关于设计绵羊Hox基因序列时遇到的问题讨论

5结论

附图一

附图二

致谢

参考文献

作者简介