猪葡萄球菌脱落毒素B基因的原核表达及其免疫原性的初步分析

摘要

在猪群中的渗出性皮炎是由猪葡萄球菌的感染引起的。研究显示毒力型和无毒力型猪葡萄球菌都可以从病猪身上得到。毒力型猪葡萄球菌可以产生四种表皮脱落毒素，分别为ExhA、ExhB、ExhC和ExhD。猪葡萄球菌表皮脱落毒素在由猪渗出性皮炎导致的皮肤病变中起了至关重要的作用。 本研究对已分离鉴定的ExhB基因、ExhB基因的5’端基因ExhB_1和3’端基因ExhB_2的PCR产物，转化入大肠杆菌，经IPTG诱导表达，用表达蛋白作为包被抗原，进行间接ELISA抗体检测方法的摸索，并将三种蛋白进行交叉保护实验。 结果表明，成功诱导表达了三种蛋白，并初步建立了检测猪葡萄球菌抗体的间接ELISA诊断方法；对三种蛋白抗血清的交叉实验显示在对ExhB抗血清的免疫实验中ExhB_1比ExhB_2具有更好的免疫原性，ExhB的抗原位点很可能在5’端。

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论文说明：缩略语表

声明

1引言

1.1病原学

1.2流行病学

1.3发病机理

1.4临床症状

1.5病理变化

1.6诊断

1.7预防与治疗

1.7.1预防

1.7.2治疗

1.8表皮脱落毒素

1.8.1脱落毒素的发现

1.8.2脱落毒素的结构特征

1.8.3脱落毒素的生物学功能

1.8.4猪葡萄球菌脱落毒素蛋白在诊断方面的应用

1.9本研究的目的和意义

1.10前人对本实验所做的基础工作

1.10.1对ExhB基因的克隆和表达

1.10.2张曦等人对ExhB蛋白进行了分段克隆及表达。

2 EXHB基因、ExhB分段基因：ExhB_1和ExhB_2的原核表达

2.1材料和方法

2.1.1菌种和载体

2.1.2主要仪器

2.1.3主要试剂

2.1.4主要溶液配方

2.1.5感受态细胞的制备

2.1.6对ExhB基因和ExhB分段基因的转化

2.1.7 ExhB蛋白和ExhB分段蛋白的诱导表达

2.1.8表达产物的检测：SDS-PAGE电泳

2.1.9重组融合蛋白的纯化

2.1.10纯化蛋白的复性

2.2结果与分析

2.2.1表达产物的SDS-PAGE电泳检测

2.2.2表达条件的优化

2.2.3重组融合蛋白的纯化

2.3讨论

3 猪葡萄球菌脱落毒素B蛋白分段表达及其免疫原性的初步分析

3.1材料

3.1.1菌种和质粒

3.1.2主要仪器

3.1.3主要药品及试剂

3.2方法

3.2.1融合蛋白的大量诱导表达

3.2.2包涵体的纯化

3.2.3包涵体的复性

3.2.4蛋白质浓度、纯度的测定及保存

3.2.5间接ELISA方法的建立

3.2.6 ExhB、ExhB_1和ExhB_2的ELISA交叉反应

3.3结果与分析

3.3.1重组蛋白的纯化

3.3.2复性后重组蛋白浓度的测定

3.3.3间接ELISA方法的建立

3.3.4 ExhB，ExhB_1，ExhB_2的ELISA交叉反应

3.4讨论

4结论

致谢

参考文献

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