黄曲霉毒素解毒酶基因的克隆与表达研究

摘要

黄曲霉毒素（Aflatoxin）主要是由黄曲霉与寄生曲霉产生的一种毒性极强的次级代谢产物，其中黄曲霉毒素B1（AFB1）是所有黄曲霉毒素中毒性最强的，可以诱发癌症，其分子稳定性高，很难被破坏。如何快速有效的去除谷物、饲料中的AFB1受到人们越来越多的关注。比较降解黄曲霉毒素AFB1的途径，生物学方法去毒具有更温和、更高效的特点。
　　 黄曲霉毒素解毒酶能够以黄曲霉毒素B1（AFB1）为底物，破坏其有毒基团，生成无毒物质。但目前对黄曲霉毒素解毒酶的研究工作报道很少。本研究意在克隆黄曲霉毒素解毒酶基因，分析它的生物学功能，为黄曲霉毒素解毒酶的工业化生产提供基础数据。研究工作的主要内容如下：
　　 1.克隆得到2088bp的黄曲霉毒素解毒酶基因。
　　 2.将黄曲霉毒素解毒酶基因与大肠杆菌表达载体pET-30a 连接，在大肠杆菌表达菌株 Rosetta(DE3)中进行胞内表达。经优化培养条件，确定其最佳诱导温度为20℃、最佳IPTG诱导浓度为0.1mmol/L、最佳诱导时间为8h。通过Western blot检测，在近77KD处有特异条带，确定所表达产物为目的蛋白，经酶活检测，去毒率为11.185％，酶活力为33.53×10-3U/g3.将黄曲霉毒素解毒酶基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K-6HisEn-5’(实验室构建)连接，在毕赤酵母表达菌株GS115中进行分泌表达，通过Western blot检测，在近77KD处有特异条带，确定表达产物为目的蛋白。经酶活检测，去毒率为25.52％，酶活力为1.76 U/g。

目录

1 引言

2 黄曲霉毒素解毒酶基因的克隆

3 黄曲霉毒素解毒酶基因在大肠杆菌中的表达

4 黄曲霉毒素解毒酶基因在毕赤酵母中的表达

5 讨论

6 结论与展望

致 谢

参 考 文 献

作 者 简 介

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