重组金黄色葡萄球菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶与脂蛋白(a)的相互作用

摘要

金黄色葡萄球菌(S. aureus)表面的纤溶酶原受体能够与宿主纤溶酶原(Plg)结合,此外,与病菌结合的Plg可以在宿主或病菌的Plg激活剂的作用下转变为纤溶酶(Pm),从而协助S. aureus穿越宿主组织屏障,达到深层入侵的目的。
　　次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是S. aureus表面的纤溶酶原(Plg)受体之一,它可以与Plg的赖氨酸结合位点(LBS)相结合。脂蛋白(a)中的载脂蛋白(a)[Apo(a)]与Plg有很高的同源性,且两者的Kringle结构域都含有LBS,其中Apo(a)的KIV10含有高亲和力的LBS。因此本实验提出了Lp(a)可以与S. aureus表面的Plg受体相结合,进而可能竞争性抑制S. aureus与Plg结合的假说,目前已经证明了Lp(a)可以与S. aureus表面的Plg受体之一α-烯醇化酶(α-enolase)相结合。
　　本研究对S. aureus表面的另外一种Plg受体IMPDH与Lp(a)的相互作用进行了研究,首先克隆了S. aureus CMCC26003的IMPDH基因,酶切后将其连接到表达载体pASK-IBA37中,并在大肠杆菌BL?21中表达了该重组蛋白(rIMPDH)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、亲和色谱层析及Western blot对rIMPDH与Lp(a)的相互作用机制进行了研究。结果表明rIMPDH可以与Lp(a)和重组KIV10(rKIV10)的LBS发生特异性结合,而且一定浓度的赖氨酸类似物6-氨基己酸(EACA)可以抑制这种结合,表明Apo(a)中的LBS参与了相互作用,然而本研究并未发现Lp(a)或rKIV10对rIMPDH与Plg的相互作用有明显的抑制。

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缩 略 语 表

1 引言

1.1 金黄色葡萄球菌的致病性及其毒力因子

1.2 金黄色葡萄球菌细胞表面的纤溶酶原受体

1.3 脂蛋白(a)的结构及其功能

1.4 立题依据

1.5 研究内容

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 实验结果与分析

3.1 金黄色葡萄球菌CMCC26003基因组的提取

3.2 rIMPDH和rKIV10目的基因的扩增

3.3 rIMPDH目的基因及载体pASK-IBA37的酶切和纯化

3.4 rIMPDH目的基因与载体pASK-IBA37的连接和转化

3.5 序列测定结果

3.6 rIMPDH蛋白的诱导表达

3.7 rIMPDH蛋白的纯化

3.8 rIMPDH蛋白含量的测定

3.9 rIMPDH活性的测定

4 讨论

5 结论

6 本论文的创新之处

致谢

参考文献

附 录

作 者 简 介