人β-防御素3(HBD3)作为佐剂对金黄色葡萄球菌灭活疫苗免疫效果的影响

摘要

人β-防御素3(Humanβ-defensin3，HBD3)除了具有非常突出的抗菌能力，还可以趋化单核细胞、巨噬细胞、CD45 RA+/ CD4+T淋巴细胞、肥大细胞和未成熟树突状细胞，诱导单核细胞和髓系树突状细胞共刺激分子CD80、CD86和CD40的表达。体外试验表明HBD3可以调节小鼠淋巴细胞的增殖反应，这一结果促使我们进一步研究HBD3在体内对特异性免疫反应的影响。
　　用金黄色葡萄球菌灭活疫苗联合HBD3在第1天和第14天腹腔免疫小鼠，于第21天处死小鼠。（试验同时设对照组:只免疫灭活疫苗;佐剂组:免疫灭活疫苗+弗氏佐剂。）ELISA检测血清IgG水平的结果显示:与对照组相比，HBD3显著提高血清IgG表达水平;较佐剂组相比，虽然略有升高但不显著。qRT-PCR检测结果显示:与对照组、佐剂组相比，HBD3显著提升共刺激分子CD80/CD86和MHCⅡ分子的mRNA表达水平。提示HBD3具有成为新型免疫佐剂增强疫苗对机体保护效果的潜力。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 防御素

1．1．1 防御素在先天性免疫反应中的作用

1．1．2 防御素在获得性免疫反应中的作用

1．1．3 防御素的免疫增强作用

1．2 HBD3

1．3 佐剂

1．4 金黄色葡萄球菌

1．5 研究目的与意义

2 实验一 HBD3在体外对正常小鼠脾细胞增殖反应的影响

2．1 前言

2．2 材料与方法

2．2．1 实验动物

2．2．2 试剂

2．2．3 仪器

2．2．4 HBD3的溶解

2．2．5 淋巴细胞悬液的制备

2．2．6 ConA最佳剂量的筛选

2．2．7 HBD3对ConA诱导淋巴细胞增殖反应的影响

2．3 数据统计与分析

2．4 结果

2．4．1 最适ConA浓度的筛选

2．4．2 HBD3对ConA诱导淋巴细胞增殖反应的影响

2．5 讨论

2．6 小结

3 试验二 HBD3对金黄色葡萄球菌灭活疫苗的免疫增强作用

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．2．1 试验动物

3．2．2 试剂

3．2．3 仪器

3．2．4 灭活疫苗的制备

3．2．5 试验分组

3．2．6 免疫方法与程序

3．2．7 血清抗体水平的检测

3．2．8 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测外周血单个细胞共刺激分子CD80／CD86和MHCⅡ分子mRNA相对表达量

3．3 数据统计与分析

3．4 实验结果

3．4．1 ELISA法检测小鼠血清IgG结果

3．4．2 MHCⅡ分子的mRNA的表达量

3．4．3 共刺激分子CD80／CD86 mRNA的表达量

3．4．4 qRT-PCR产物电泳检测结果

3．5 讨论

3．5．1 防御素增强机体对外来抗原物质的免疫应答

3．5．2 HBD3对小鼠血清IgG水平的影响

3．5．3 HBD3对CD80／CD86和MHCⅡ类分子mRNA的表达水平的影响

3．5．4 HBD3作为佐剂提高小鼠血清特异性IgG表达水平的一些机理推测

3．6 小结

致谢

参考文献

附录

作者简介