西芹腐根物质浸提液作用后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选及致弱机理的研究

摘要

黄瓜枯萎病（Cucumber wilt）是由尖孢镰刀菌黄瓜专化型引起的一种土传病害，病菌生活力极强，以菌丝体、菌核和厚垣孢子在土壤、病残体和种子上越冬，在土壤中可存活5-6年或更长的时间。近年来，随着设施栽培生产黄瓜的不断发展，使得黄瓜枯萎病病害问题十分突出，发病程度也日趋严重。近年来，国内外学者应用植物化感技术防控病害已成为植物病害防控新的趋势。化感作用虽然是近二十多年来得到科学界普遍重视的研究领域，但是利用化感作用筛选病原菌的弱毒菌株及其致病机理的研究并不普遍。
　　本实验在室内培养基条件下，利用西芹腐根及根际区土壤乙醇、丙酮和蒸馏水浸提液进行作用1代和连续多代作用黄瓜枯萎病菌后继代培养，研究其对黄瓜枯萎病菌的化感作用效果及温室人工接种致病力变化情况，以筛选黄瓜枯萎病菌的弱毒菌株，并对其致病力稳定性研究;和对不同浸提液处理的每一代病菌孢子数量的形成和孢子萌发率及菌体分泌的镰刀菌算含量、果胶酶活性、纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性进行测定，目的以研究黄瓜枯萎病菌的致弱作用机理。
　　1.西芹腐根及根际区土壤乙醇、丙酮和蒸馏水浸提液处理1代黄瓜枯萎病菌后未筛选到黄瓜枯萎病菌的弱毒菌株。不同浸提液处理在第1代对黄瓜枯萎病菌菌落生长表现为显著的化感抑制作用，随代数的增加抑制作用减小，处理菌落直径均＜其浸提剂对照＜总对照;不同浸提液处理后与其对照和总对照相比，病情指数均降低，致病力下降，未降到弱毒菌株的范围。西芹腐根乙醇、丙酮和蒸馏水处理第6代的病情指数分别为58.67％、57.83％和61.67％;西芹腐根际区土乙醇、丙酮和蒸馏水处理的病情指数分别为59.17％、58.83％和62.67％。
　　2.西芹腐根及根际区土壤乙醇、丙酮和蒸馏水浸提液连续多代（6代）处理黄瓜枯萎病菌后筛选到3株黄瓜枯萎病菌的弱毒菌株，分别为第5代腐根乙醇和腐根丙酮、第6代腐根际区土壤乙醇浸提液处理。西芹腐根及根际区土壤乙醇和丙酮浸提液处理的黄瓜枯萎病菌落直径较其对照生长缓慢，表现为化感抑制作用，差异显著;浸提液连续多代处理黄瓜枯萎病菌其病情指数逐代下降，致病力逐代减弱，至第5代时，西芹腐根乙醇、丙酮浸提液处理的病情指数分别为4.17％、3.33％和第6代西芹腐根际区土壤乙醇浸提液处理的病情指数为9.17％，确定为黄瓜枯萎病菌的弱毒菌株。
　　3.西芹腐根及根际区土壤乙醇、丙酮和蒸馏水浸提液作用1代后，继代培养6代过程中，在第1代对黄瓜枯萎病菌孢子数量的形成和孢子萌发率表现抑制作用;对分泌的镰刀菌酸含量具有减少的作用;抑制了分泌的果胶酶活性、纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性，处理＜浸提剂对照＜总对照;果胶酶活性与致病力显著正相关，镰刀菌酸含量、纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性不相关。
　　4.西芹腐根及根际区土壤乙醇、丙酮和蒸馏水浸提液连续多代作用黄瓜枯萎病菌后，继代培养6代过程中，每一代对黄瓜枯萎病菌孢子数量的形成和孢子萌发率均有明显的抑制作用;对其分泌的镰刀菌酸含量，具有减少的作用;抑制了分泌的果胶酶活性、纤维素酶活性和β-葡萄糖苷酶活性，处理＜浸提剂对照＜总对照;镰刀菌酸含量、果胶酶活性和β-葡萄糖苷酶活性;与其致病力显著正相关，纤维素酶活性与其致病力不相关。
　　5.筛选到的弱毒菌株命名为FOC-RE-5、FOC-RA-5、FOC-SE-6。在培养基条件下，继代培养7代过程中，菌落直径扩展速率均＜强毒菌株FOC，变化稳定，表现很好的遗传稳定性。在温室人工接种实验表明，弱毒菌株FOC-RE-5、FOC-RA-5、FOC-SE-6连续接种7代，病情指数平均值分别为8.12％、7.48％和13.26％，表现相对的致病力稳定性，弱毒菌株具有较高的利用价值。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 植物化感作用的研究概况

1．1．1 植物-植物的化感作用

1．1．2 植物-微生物的化感作用

1．1．3 微生物化感作用机理的研究

1．1．4 化感物质的研究概况

1．2 弱毒菌株筛选的研究概况

1．2．1 弱毒菌株的定义

1．2．2 弱毒菌株的筛选

1．2．3 弱毒菌株的致弱机理

1．3 本研究的目的及意义

1．4 技术路线

2 西芹腐根及根际区土壤浸提液处理1代后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

2．1 材料方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验方法

2．1．3 数据处理

2．2 结果与分析

2．2．1 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后对继代培养黄瓜枯萎病菌的化感作用

2．2．2 西芹腐根及腐根际区土浸提液作用1代后继代培养后黄瓜枯萎病菌的致病力的变化

2．3 讨论

2．3．1 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后黄瓜枯萎病菌化感作用

2．3．2 西芹腐根及根际区土浸提液处理1代后黄瓜枯萎病菌致病力变化

2．4 小结

2．4．1 西芹腐根浸提液作用1代后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

2．4．2 西芹腐根际区土浸提液作用1代后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

3 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

3．1 材料与方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验方法

3．1．3 数据处理

3．2 结果与分析

3．2．1 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌的化感作用

3．2．2 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后对黄瓜枯萎病菌的致病力变化

3．3 讨论

3．3．1 西芹腐根及根际区土浸提液连续处理黄瓜枯萎病菌的化感作用

3．3．2 西芹腐根及根际区土浸提液连续处理黄瓜枯萎病菌的致病力变化

3．4 小结

3．4．1 西芹腐根浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

3．4．2 西芹腐根际区土浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌弱毒菌株的筛选

4 西芹腐根及根际区土浸提液对黄瓜枯萎病菌的致弱机理

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 试验方法

4．1．4 数据处理

4．2 结果与分析

4．2．1 西芹腐根及根际区土作用1代后黄瓜枯萎病菌孢子数量变化

4．2．2 西芹腐根及根际区土作用1代后黄瓜枯萎病菌分泌的镰刀菌酸含量变化

4．2．3 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后病菌分泌的细胞壁降解酶活性变化

4．2．4 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后黄瓜枯萎病菌的致病力与其分泌的毒素及细胞壁降解酶的关系

4．2．5 西芹腐根及根际区土连续多代作用后黄瓜枯萎病菌孢子数量变化

4．2．6 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌分泌的镰刀菌酸含量变化

4．2．7 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌分泌的细胞壁降解酶活性变化

4．2．8 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后黄瓜枯萎病菌的致病力与其分泌的毒素及细胞壁降解酶的关系

4．3 讨论

4．3．1 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后对黄瓜枯萎病菌孢子数量的形成、分泌镰刀菌酸含量和细胞壁降解酶活性的变化

4．3．2 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后对黄瓜枯萎病菌的孢子数量的形成、镰刀菌酸含量和细胞壁降解酶活性的变化

4．4 小结

4．4．1 西芹腐根及根际区土浸提液作用1代后对黄瓜枯萎病菌的致弱机理

4．4．2 西芹腐根及根际区土浸提液连续多代作用后对黄瓜枯萎病菌的致弱机理

5．黄瓜枯萎病菌弱毒菌株致病力遗传稳定性的研究

5．1 材料与方法

5．1．1 实验材料

5．1．2 实验方法

5．1．3 数据分析

5．2 结果与分析

5．2．1 黄瓜枯萎病菌弱毒菌株继代培养过程中菌落生长状况

5．2．2 黄瓜枯萎病菌弱毒菌株继代培养过程中菌株致病力变化

5．3 讨论

5．4 小节

6 结论

7 创新点

致谢

参考文献

作者简介