中间锦鸡儿干旱胁迫下的叶片全长cDNA文库构建

摘要

水是植物生长过程中必不可少的组分，全世界每年由于干旱导致的作物减产超过其他生物、非生物胁迫造成减产的总和。大多数植物遭受干旱逆境后各个生理过程都会受到不同程度的影响，因此培育抗逆作物新品种成为应对干旱灾害的一种重要手段。
　　中间锦鸡儿（Caragana intermediaKuang et H.C.Fu）是生长于我国西北部干旱荒漠地区的豆科属锦鸡儿灌木，是一种重要的饲用灌木和植树造林树种。长期的进化过程中，中间锦鸡儿适应了各种不良的生长环境，具有极强的抗旱、抗寒、耐热、耐盐碱能力，是研究植物抗逆的优良植物。过去对中间锦鸡儿抗逆能力的研究主要集中在生理生化和形态学等方面，对其抗逆分子机制的研究刚刚起步。为寻找中间锦鸡儿抗旱相关基因，培育抗旱新品种，本研究构建了干旱胁迫下的叶片全长c DN A文库。
　　本文以土壤干旱15天的中间锦鸡儿幼苗为样品，利用 Clontech公司生产的SMARTerTMPCR cDNA Synthesis Kit反转试剂盒合成双链cDNA，分段回收和纯化cDN A后，将其克隆到 T载体并转化大肠杆菌DH5α；通过单克隆的培养，共获得2410个阳性克隆。对其中52个克隆进行测序， ESTs平均长度908bp，经 BLAS T比对，这些序列分别与鹰嘴豆、蒺藜苜蓿、大豆等植物的 ESTs高度同源。中间锦鸡儿干旱胁迫下的叶片全长cDNA文库的构建为其基因资源保存和植物抗旱机理的研究奠定了基础。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 植物抵抗干旱胁迫的机制

1.2 中间锦鸡儿研究现状

1.3 全长cDNA文库研究进展

1.4 中间锦鸡儿cDNA文库构建的研究现状

1.5 本研究的内容、目的及意义

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 植物的培养

2.3 干旱处理及取样

2.4 确定最佳干旱时间

2.5 总RNA的提取（大体积）

2.6 poly A＋mRNA的分离纯化

2.7 全长cDNA的合成

2.8 cDNA的分段回收

2.9 cDNA的DH5α克隆

2.10 单克隆的PCR检测

2.11 文库质量的检测

2.12 部分克隆的测序与分析

3.1 最佳土壤干旱时间的确定

3.2 总RNA的提取

3.3poly A＋mRNA的分离纯化

3.4 双链cDNA的合成

3.5 cDNA的分段回收

3.6 蓝白斑挑选

3.7 阳性克隆的PCR检测

3.8 文库质量的检测

3.9 部分全长cDNA克隆的测序及比对结果

4 讨论与结论

致谢

参考文献

作 者 简 介