外源性IL-6与TNF-α对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡的影响

摘要

目的：应用外源性IL-6、TNF-α以及IL-6和TNF-α的混合物作用于奶牛乳腺炎乳汁中性粒细胞，研究其对奶牛乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响，以阐明IL-6和TNF-α与奶牛乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的相互关系，为以后进一步研究奶牛乳腺炎的发病机理提供实验依据。
　　方法：取奶牛乳腺炎病例的乳汁，分离中性粒细胞，并体外培养。应用不同浓度的外源性IL-6与TNF-α以及IL-6与TNF-α的混合物对其进行作用，于不同时间点提取受作用细胞，染色处理，应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，研究IL-6与TNF-α对中性粒细胞凋亡产生的影响。
　　结果：⑴使用牛外周血中性粒细胞分离液分离出的乳汁细胞大部分为中性粒细胞，纯度达到90％以上。⑵0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL的外源性IL-6在6h、12h、24h、48h、72h对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡均产生抑制作用。⑶2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度的外源性TNF-α在6～48h范围内对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生促进作用。⑷外源性IL-6与TNF-α共同作用时，6～48h范围内：1:100、1:50比例条件下对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生促进作用；100:1、50:1比例条件下对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生抑制作用，1:1比例条件下，除12h作用外，均对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生促进作用，12h作用时产生抑制作用。
　　结论：经牛外周血中性粒细胞分离液分离得到的乳汁细胞中大部分为中性粒细胞；外源性IL-6对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生抑制作用；外源性TNF-α在6～48h范围内对乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞凋亡产生促进作用;IL-6与TNF-α不同比例共同作用于体外培养的奶牛乳汁中性粒细胞后，IL-6占比多以抑制细胞凋亡为主， TNF-α占比多以促进细胞凋亡为主，但TNF-α对细胞凋亡的促进作用较IL-6对细胞凋亡的抑制作用强。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 奶牛乳腺炎

1.1.1 奶牛乳腺炎的危害

1.1.2 乳腺炎乳汁体细胞计数

1.1.3 奶牛乳腺炎的治疗

1.2 细胞因子

1.2.1 细胞因子概述

1.2.2 IL-6

1.2.3 肿瘤坏死因子

1.3 细胞凋亡与坏死

1.3.1 细胞凋亡概述

1.3.2 细胞凋亡的形态学变化

1.3.3 细胞凋亡与坏死

1.4 流式细胞术

1.4.1 流式细胞术概述

1.4.2 流式细胞术原理

1.4.3 流式细胞术的应用

1.5 研究的目的及意义

2.1.1 实验材料

2.1.2 耗材

2.1.3 主要仪器设备

2.1.4 试剂及药品

2.1.5 主要试剂的配制

2.2 方法

2.2.1 乳腺炎奶牛乳汁中性粒细胞的提取、染色及计数

2.2.2 外源性IL-6对乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.2.3 外源性TNF-α对乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.2.4 外源性IL-6与TNF-α共同作用对乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.2.5 统计学方法

2.3.1 临床观察

2.3.2 乳汁中性粒细胞提取情况

2.3.3 流式细胞仪检测外源性IL-6对细胞凋亡的影响

2.3.4 流式细胞仪检测外源性TNF-α对细胞凋亡的影响

2.3.5 外源性IL-6与TNF-α共同作用对乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.4 讨论

2.4.1 乳腺炎乳汁中性粒细胞分离与培养

2.4.2 外源性IL-6对乳腺炎乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.4.3 外源性TNF-α对乳汁中性粒细胞凋亡的影响

2.4.4 外源性IL-6与TNF-α共同作用对奶牛乳汁中性粒细胞凋亡的影响

3结论

致谢

参考文献

作 者 简 介