FMDV各型表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的表位预测及不同种小鼠IgG亚型变化的影响

摘要

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus，FMDV)引起的偶蹄动物易得的一种烈性疾病，对养殖业造成了巨大的经济损失。随着生物技术的发展，FMD疫苗的研制也从传统疫苗转向新型疫苗，其中表位疫苗因其呈现出诸多优势而成为疫苗研究的热点，如能被多种遗传背景的MHC分子识别并结合，使抗原得到高效的递呈，因此在有效的应对病原微生物的变异以及免疫反应中的诸多不利因素等免疫方面具有独特的优势。本研究的具体实验内容如下：
　　1、本研究通过对已获得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的氨基酸序列，应用在线软件Swiss-Model和Swiss-PbdViewer软件成功对该蛋白三维结构进行预测，并标注了三型FMDV不同表位的位置。
　　2、用已获得的嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的昆明小鼠，以PBS作为阴性对照组。小鼠经三次免疫后，摘取其脾脏组织分离总淋巴细胞，按既定方法处理并通过流式细胞仪分析各免疫组小鼠CD4+ T和CD8+ T细胞的变化，试验结果显示：嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组的CD4+T与CD8+T数量高于 SLP免疫组及 PBS对照组，差异显著（P＜0.05）。该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可诱导机体产生免疫反应。
　　3、将嵌入型蛋白SLP-Multi VP1与重组蛋白SLP免疫6周龄的BALB/c小鼠和昆明小鼠，用间接ELISA方法检测了三次免疫后各组小鼠的总IgG水平，试验结果显示，2种小鼠均能产生较高滴度的 IgG（P＜0.05），该结果表明嵌入型蛋白SLP-Multi VP1具有良好的抗原性，并且2种小鼠的IgG水平差异不显著（P＞0.05），表明不同种小鼠间无差异性。
　　4、经第三次免疫后，采集BALB/c和昆明小鼠的血清，采用IgG亚型ELISA试剂盒(eBioscience公司)进行检测IgG1和IgG2a水平，获得的实验数据通过SPSS统计学分析，试验结果显示：在两种免疫动物小鼠模型中，嵌入型蛋白SLP-Multi VP1组IgG1和IgG2a水平均高于SLP免疫组，差异显著（P＜0.05）。另外，在嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫组中，IgG2a的水平高于IgG1，差异显著（P＜0.05）。而在SLP免疫组中，IgG1和IgG2a水平差异不显著（P＞0.05），该结果提示嵌入型蛋白SLP-Multi VP1可能倾向于激发Th1类免疫应答。
　　本试验对各型FMDV VP1基因表位嵌入型蛋白SLP-Multi VP1免疫特性更深入的研究奠定了基础。

目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 表位疫苗概述

1.1.1 研制表位疫苗的理论基础

1.1.2 表位的鉴定与筛选

1.1.3 表位疫苗的应用

1.1.4 表位疫苗所存在的问题

1.1.5 口蹄疫表位疫苗

1.2.1 S-层蛋白的特点及功能

1.2.2 S-层蛋白的提取

1.2.3 S-层蛋白的应用前景

1.3 本研究的目的和意义

2嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的三级结构预测

2.1 方法

2.1.1分析嵌入型蛋白SLP-Multi VP1中三个不同表位的氨基酸序列

2.1.2嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的三级结构预测

2.2 结果

2.2.1嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的氨基酸序列

2.2.2嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的三维结构预测

2.3 讨论

3嵌入型蛋白SLP-Multi VP1的免疫原性检测

3.1 材料

3.1.1 试验动物

3.1.2 主要试剂

3.1.3 主要仪器设备

3.2.1 免疫原的制备

3.2.2 动物的分组及免疫

3.2.3流式细胞仪检测SLP-Multi VP1诱导小鼠的CD4和CD8

3.2.4 血清样品收集及保存

3.2.5 ELISA检测免疫小鼠血清中的特异性抗体

3.2.6 ELISA检测免疫小鼠血清中抗体亚型IgG2a和IgG1

3.3 结果

3.3.1嵌入型蛋白GST-SLP-Multi VP1的表达、纯化和GST标签蛋白的切除

3.3.2 流式细胞仪检测结果

3.3.3 BALB/c和昆明小鼠血清中总IgG的ELISA检测结果

3.3.4 小鼠血清中IgG亚型IgG2a和IgG1结果

3.4 讨论

4 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介