FoxO1与其调控肌纤维类型相关基因的研究及对羊肉质的影响

摘要

通过荧光定量PCR和酶联免疫法，对5、6、8、12月龄苏尼特羊（32只）和巴美肉羊（32只）背最长肌、股二头肌和臂三头肌中CnAα、NFATc3、MEF2c基因的表达量和FoxO1的蛋白表达量进行测定。同时测定了肉质指标，如剪切力、pH(pH0、pH24)及色泽（L*、a*、b*）。研究 CaN/NFAT、CaN/MEF2通路相关基因与 FoxO1基因、MyHC家族基因表达的相关性，分析了CnAα、NFATc3、MEF2c基因表达水平及FoxO1蛋白水平对肉质的影响。结果显示:
　　CnAα、NFATc3及MEF2c在苏尼特羊和巴美肉羊均与FoxO1及MyHCs表现出相近的组织表达差异规律，即臂三头肌总是显著高于背最长肌（p＜0.05）。苏尼特羊的臂三头肌和股二头肌中，FoxO1与NFATc3及Mef2c都呈负相关，且CnAα、NFATc3及MEF2c都与MyHCI呈负相关。在背最长肌和臂三头肌中，MEF2c均与II型肌球蛋白重链基因表达呈正相关。CnAα、NFATc3及MEF2c总表现出两两正相关。巴美肉羊的背最长肌和臂三头肌中，CnAα、NFATc3及 MEF2c均与 FoxO1、MyHCI呈负相关。CnAα总与NFATc3呈正相关。
　　在与肉质相关性方面，苏尼特羊的背最长肌和臂三头肌中，CnAα、NFATc3及MEF2c均与剪切力呈正相关，且CnAα与pH、NFATc3与色泽均呈负相关。巴美肉羊的CnAα与剪切力呈负相关，与pH24呈负相关且在股二头肌达到显著（p＜0.05）。MEF2c与剪切力、pH24和红度值呈正相关，NFATc3总与亮度呈负相关。
　　在 FoxO1蛋白研究中发现，苏尼特三个部位 FoxO1蛋白表达随月龄变化趋势一致，都在8月龄最低。5月龄股二头肌显著高于背最长肌和臂三头肌（p＜0.05）。此外，苏尼特羊FoxO1蛋白表达与mRNA随月龄变化呈正相关。巴美肉羊中FoxO1蛋白表达趋势基本与苏尼特羊相反，三个部位均在12月龄最低。8月龄的股二头肌显著高于其他两个部位（p＜0.05）。巴美背最长肌FoxO1蛋白与mRNA表达呈正相关。FoxO1蛋白表达量总与两种羊的剪切力呈负相关，与pH24和亮度值呈正相关。

目录

声明

1 引言

1.1 苏尼特羊及巴美肉羊简介

1.2 影响肉品质的因素及肉质评定指标

1.3 FoxO1转录因子简介及其对肉品质的影响

1.3.1 FoxO1对骨骼肌发育及肉质的影响

1.3.2 FoxO1与肌纤维性状的相关性及其通路基因介绍

1.4 实时荧光定量PCR技术

1.5 酶联免疫吸附技术（ELISA）

1.5.1 酶联免疫技术介绍

1.5.2 酶联免疫法在肉品质研究中的应用

1.6 研究内容、目的及意义

1.7 技术路线

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 试验动物肉样采集

2.1.2 试验仪器CL-M嫩度仪

2.1.3 试验试剂蛋白裂解液PBS

2.2 试验方法及主要试剂配制

2.2.1 总RNA提取及反转录

2.2.2 实时定量PCR

2.2.3 ELISA测定肌肉组织FoxO1蛋白水平

2.2.4 剪切力的测定

2.2.5 pH的测定

2.2.6 肉色的测定

2.3 数据处理与分析

3 结果与分析

3.1 实时荧光定量PCR及ELISA标准品的检测

3.1.1 RNA电泳检测

3.1.2 实时荧光定量PCR产物电泳检测

3.1.3 实时定量扩增效率曲线分析

3.1.4 实时定量溶解曲线分析

3.1.5 实时定量扩增曲线分析

3.1.6 ELISA标准曲线分析

3.2 苏尼特羊及巴美肉羊各基因的表达规律及相关性分析

3.2.1 苏尼特羊各基因mRNA表达规律

3.2.2 巴美肉羊各基因mRNA表达规律

3.2.3 苏尼特羊与巴美肉羊基因mRNA表达量对比

3.2.4 苏尼特羊各基因的相关性分析

3.2.5 巴美肉羊各基因相关性的分析

3.3 FoxO1蛋白表达量的表达规律

3.3.1 苏尼特羊FoxO1蛋白的表达规律

3.3.2 巴美肉羊FoxO1蛋白的表达规律

3.3.3 苏尼特羊、巴美肉羊FoxO1蛋白表达量的对比

3.3.4 苏尼特羊、巴美肉羊FoxO1蛋白与mRNA表达量的相关性

3.4.1 苏尼特羊肉品质指标

3.4.2 巴美肉羊肉品质指标

3.5.1 苏尼特羊肉质与基因mRNA表达相关性

3.5.2 苏尼特羊肉质与FoxO1蛋白表达量的相关性

3.5.3 巴美肉羊肉质与基因mRNA表达相关性

3.5.4 巴美肉羊肉质与FoxO1蛋白表达量的相关性

4 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介