不可分型流感嗜血杆菌F蛋白与脂蛋白(a)的相互作用

摘要

F蛋白（ Protein F, PF）是不可分型流感嗜血杆菌（ nontypeable Haemophilus influenzae, NTHi）表面的一种纤溶酶原（Plasminogen, Plg）受体。Plg利用自身的赖氨酸结合位点（LBS）与PF相结合。脂蛋白（a）[lipoprotein(a), Lp(a)]中的载脂蛋白[apolipoprotein(a), Apo(a)]与Plg高度同源，其KIV10结构域含有高亲和力的LBS。基于此，本实验提出Lp(a)可能与NTHi上的PF相结合，从而竞争性的抑制PF与Plg的结合。
　　本实验利用多种方法检测了重组PF（rPF）以及缺失末端赖氨酸残基的PFΔk（rPFΔk）与Plg、Lp(a)的相互作用。
　　首先利用大肠杆菌BL21诱导表达得到了rPF及rPFΔk，并利用亲和填料进行了纯化。然后通过ELISA结合及抑制试验检测了rPF及rPFΔk与Plg、Lp(a)的相互作用。结合试验结果显示：rPF能够与Plg、Lp(a)结合，且rPF组与Plg、Lp(a)的结合值显著高于rPFΔk组。抑制试验结果如下：1）EACA能够抑制rPF与Plg、Lp(a)的结合，当浓度达到2 mmol/L时EACA对rPF与Plg结合的抑制作用显著增强。与此同时，ECAC对rPF与Lp(a)结合的抑制作用在其浓度为0.2 mmol/L时就明显增强；2）当Lp(a)浓度达到50 ng/100μL时，能够显著的抑制rPF与Plg的结合。此外，本实验利用亲和层析和Western blot也证明了rPF与Plg、Lp(a)的特异性结合主要是由Plg、Lp(a)的LBS与rPF羧基末端的赖氨酸残基相互作用形成的。Lp(a)能够竞争性的抑制rPF与Plg的结合，这表明Lp(a)在抗NTHi感染过程中可能具有一定的作用。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 流感嗜血杆菌及其表面的纤溶酶原受体

1.2 Plg-Pm系统

1.3 人血浆Lp(a)

1.4 立题依据

1.5 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 NTHi ATCC49247基因组的提取

3.2 目的基因的扩增

3.3 质粒的提取

3.4 质粒及目的片段酶切结果

3.5 菌落PCR结果

3.6 工程菌表达产物的SDS-PAGE分析

3.7 重组蛋白的纯化

3.8 目的蛋白标签的切除及纯化

3.9 标签切除效果的Western blot检测

3.10 ELISA检测rPF、rPFΔk与Plg、Lp(a)的结合

3.11 亲和色谱层析检测rPF、rPFΔk与Lp(a)的结合

3.12 ELISA检测EACA对rPF与Plg、Lp(a)结合的抑制

3.13 ELISA检测Lp(a)对rPF与Plg结合的抑制

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介