绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR及绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立

摘要

羊支原体性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats，MPSG）是一种羊的接触传染性疾病，其主要病原菌为绵羊肺炎支原体（ Mycoplasma ovipneumoniae，MO），羊感染后主要表现为咳嗽、喘气、渐进性消瘦等临床症状以及肺间质增生性炎症等病理变化，给我国羊养殖业带来巨大经济损失。
　　本研究根据绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体（Mycoplasma arginini，MA）基因的保守序列分别设计了一对特异性引物、优化反应条件，建立了同时检测绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法。本实验室已成功表达了绵羊肺炎支原体的溶血素蛋白，以该重组蛋白作为抗原进行包被，并对反应条件进行摸索，建立间接ELISA方法检测血清中绵羊肺炎支原体的抗体水平。采集临床样品，分别对其进行支原体病原菌的分离培养、绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测以及绵羊肺炎支原体的间接ELISA检测，对三种检测方法进行结果比较。
　　结果表明分离培养方法与双重 PCR方法检测结果符合率为81.37％，且双重PCR检测方法比分离培养方法更敏感；分离培养方法与间接ELISA方法检测结果符合率为94.85%，差异不显著（P＞0.05）。
　　本研究建立的绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法和建立的绵羊肺炎支原体间接 ELISA检测方法可以满足临床快速、有效、正确地检测病原菌需要，对临床上由绵羊支原体引起的肺炎的快速诊断具有重要的实用意义。

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 支原体

1.2 羊支原体性肺炎

1.3 绵羊肺炎支原体

1.4 流行病学

1.5 临床症状

1.6 诊断

1.7 防治

1.8 本研究的目的及意义

2 绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

3 绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.4 试验结果

3.5 讨论

4 临床样品的检测

4.1 临床样品

4.2 试剂

4.3 试验方法

4.4 试验结果

4.5 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介