牛卵丘-卵母细胞复合体中uPA和uPAR蛋白表达检测

摘要

尿激酶型纤溶酶原激活物（ uPA）与其受体 uPAR结合后，能够激活体细胞内多条信号通路，促进细胞有丝分裂，抑制细胞凋亡。但是 uPAR是否在牛 COCs中表达以及 uPA在牛卵泡内表达的意义，尚未见文献报道。为了了解 uPA与其特异受体 uPAR在牛卵丘-卵母细胞复合体（ COCs）中的协同表达情况，本研究以未成熟牛卵丘-卵母细胞复合体为研究对象，运用免疫组化和Western blot技术，分别检测了uPA与uPAR蛋白在牛次级卵泡与卵丘和卵母细胞中的表达情况。免疫组织化学检测结果显示，在卵丘、颗粒和卵泡膜细胞内 uPA与 uPAR蛋白均有表达，而卵母细胞仅表达 uPAR；Western blot检测结果显示，获得的约55kD和43kD大小蛋白条带与uPA与 uPAR蛋白预期大小相符，不仅证明了人源两种抗体在牛属细胞上使用的有效性，而且验证了免疫组化技术在牛卵丘与卵母细胞蛋白表达检测的结果。极体排出率统计结果显示，u PA组卵母细胞第一极体排出率显著升高，而同时添加其受体抗体阻断功能后，卵母细胞第一极体排出率显著降低，推测 u PA通过其受体途径能够促进牛卵母细胞的核成熟进程。本研究结果对于深入理解牛卵泡发育与卵母细胞成熟机制有重要意义。

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缩 略 语 表

1 引言

1.1 卵母细胞成熟概述

1.2 卵丘细胞与卵母细胞

1.3 uPA/uPAR 系统及相关信号通路综述

2 材料与方法

2.1 仪器与试剂

2.2 牛卵巢获得与牛 COCs 收集

2.3western blot

2.4 牛卵巢卵泡组织切片制作

2.5 免疫组织化学染色

2.6 牛卵丘细胞收集和体外培养

2.7 牛 COCs 成熟培养及第一极体挑出率统计

3 结果

3.1Western blot检测结果

3.2 免疫组化结果

3.3 卵丘细胞培养

3.4 极体排出率统计结果

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介