蒙药荜茇宁的光谱分析方法及其与牛血清白蛋白相互作用的研究

摘要

荜茇宁(Piperlonguminine，GBN)是蒙药荜茇的降血脂活性成分，为胡椒碱类衍生物，迄今尚无有效测定生物样品中GBN的方法。本研究工作以GBN为研究对象，建立了能够准确检测生物样品中GBN的新方法，并采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法研究了GBN与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。这一工作对理解GBN在生物体内的代谢过程以及阐明GBN在体内的药理作用具有重要的理论意义。
　　首先将稀土配合物偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)作为光谱探针，在酸性条件下，以偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)与GBN形成组成比为1∶1∶2配合物为基础，研究了GBN与偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)作用的紫外-可见吸收光谱、共振瑞利散射光谱，分别建立了褪色分光光度法、共振瑞利散射法测定生物样品中GBN的新方法。方法的线性范围分别为0.02733～0.5466μg/mL、0.02733～5.466μg/mL，检出限为0.02206μg/mL、0.00859μg/mL。利用该体系对生物样品中的GBN进行测定，并与已有测定GBN的方法进行比较，发现在灵敏度、抗干扰性等方面均有提高。还根据GBN具有荧光特性且荧光强度可被表面活性剂吐温-20增敏的特性，建立了胶束增敏荧光法测定GBN，线性范围为0.02733～8.199μg/mL，检出限为0.001690μg/mL，可用于生物样品经适当分离后GBN的测定。在此基础上，采用同步荧光技术消除生物样品的背景荧光对GBN荧光光谱的干扰，建立了直接测定血清中GBN含量的新方法，线性范围为0.005466～3.2796μg/mL，检出限为0.001197μg/mL，可快速进行大鼠血清中GBN含量的直接荧光测定。拟定的荧光方法灵敏度高、选择性好，实际样品测定结果令人满意。
　　在GBN与蛋白质相互作用方面，采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法，在模拟生理环境条件下，分别研究了胡椒碱(Piperine，PP)、姜黄素(Curcumin，Cur)与GBN之间的相互作用，探讨其对GBN与BSA作用的影响。结果表明，GBN、PP、Cur与BSA的相互作用过程均属于静态猝灭，结合常数Ka(BSA-GBN)＜Ka(BSA-PP)、Ka(BSA-GBN)＞Ka(BSA-Cur);计算不同温度下的结合参数、作用距离及相应热力学参数，推断其作用力类型分别为静电作用、疏水作用、疏水作用;标记竞争实验显示，与BSA的作用位点为siteⅠ、siteⅡ、siteⅡ;紫外吸收光谱、同步荧光光谱显示GBN、PP、Cur改变了色氨酸残基周围的环境，对BSA构象产生了影响。多元配体的协同性作用分析表明，GBN、PP、Cur单独与BSA的结合作用是负协同性的;PP、Cur分别与GBN共存时，对GBN与BSA的相互结合无协同性作用，但是K(BSA-PP-GBN)＞K(BSA-GBN)、K(BSA-Cur-GBN)＞K(BSA-GBN)，表明三元体系中GBN与BSA的结合稳定性增加，PP、Cur对GBN与BSA结合的作用属于添加。三维荧光光谱的Stokes位移和荧光强度变化，进一步说明GBN与PP、Cur之间存在相互作用。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 蒙药荜茇的简介

1．1．1 蒙医药发展研究现状

1．1．2 蒙药荜茇

1．1．3 荜茇宁的分析方法

1．2 药物分析光谱法研究概况

1．2．1 紫外-可见分光光度法

1．2．2 荧光分光光度法

1．2．3 化学发光法

1．2．4 共振瑞利散射法

1．3 有机药物小分子与血清白蛋白的相互作用

1．3．1 血清白蛋白

1．3．2 药物小分子与血清蛋白的相互作用

1．3．3 药物小分子与血清蛋白相互作用的检测方法

1．3．4 药物相互作用

1．4 研究内容及意义

参考文献

第二章 蒙药荜茇有效成分荜茇宁的光谱法研究及应用

2．1 偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)光谱探针褪色光度法测定蒙药有效成分荜茇宁

2．1．1 前言

2．1．2 实验部分

2．1．3 结果与讨论

2．1．4 结论

2．2 偶氮胂Ⅲ-La(Ⅲ)-蒙药茇荜宁的共振瑞利散射光谱分析及应用

2．2．1 前言

2．2．2 实验部分

2．2．3 结果与讨论

2．2．4 结论

2．3 胶束增敏荧光法测定蒙药荜茇有效成分荜茇宁

2．3．1 前言

2．3．2 实验部分

2．3．3 结果与讨论

2．3．4 同步荧光光谱法

2．3．5 结论

参考文献

第三章 药物对蒙药荜茇宁与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究

3．1 胡椒碱对荜茇宁与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究

3．1．1 前言

3．1．2 实验部分

3．1．3 结果与讨论

3．1．4 结论

3．2 姜黄素对荜茇宁与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究

3．2．1 前言

3．2．2 实验部分

3．2．3 结果与讨论

3．2．4 结论

参考文献

结论与展望

致谢

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