大连黑牛X\Y精子分离和生产技术研究

摘要

目前利用性控精液进行人工授精和生产性控胚胎，是比较有效的家畜性别控制方法。生产性控冻精应用最广泛的方法是利用改进的流式细胞仪进行精子分离。本研究以荷斯坦牛性控精液生产技术流程为基础，根据大连黑牛精液特点，通过调整生产过程中的精子分离技术参数，建立大连黑牛性控冷冻精液生产技术流程。
　　实验结果:利用流式细胞仪分离大连黑牛精液，在保证一定分离速度的同时，X/Y精子纯度指标可以达到89％以上(89％～91％);通过调整冷冻稀释液中甘油浓度，明显提高了大连黑牛性控冷冻精液解冻后精子活力;在冷冻稀释液中添加抗氧化剂VE和CAT，提高了大连黑牛性控冷冻精液解冻后精子活力和存活时间;使用分离后的精液进行人工授精，受胎率为58.3％(235/403)，公犊比例为93.2％(219/235)。
　　实验结论:本研究以荷斯坦牛性控冷冻精液生产技术为基础，通过调整精子分离技术参数和精液冷冻方法，建立了大连黑牛精子分离和性控冻精生产技术流程，并成功进行小规模产业化示范应用。证明利用流式细胞仪进行大连黑牛性控冷冻精液生产的可行性。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 文献综述

1．1 哺乳动物精子分离技术

1．2 流式细胞仪分离X／Y精子的原理

1．3 流式细胞仪分离精子技术的应用和存在的问题

1．4 冷冻、解冻过程中精子受到的损伤

1．5 精子冷冻中防冻剂的应用

1．6 精液冷冻中抗氧化剂的应用

1．7 牛性控冷冻精液的人工授精技术

1．8 大连黑牛

1．9 研究目的与意义

第二章 实验材料

2．1 仪器设备

2．2 药品和试剂

2．3 溶液配制

2．4 原精采集

2．5 原精运输与保存

第三章 精子分离和冷冻

3．1 精子染色

3．2 精子分离

3．3 原精活力对分离效果的影响

3．4 精子平衡和冷冻

3．5 不同甘油浓度的冷冻稀释液对精子冷冻的影响

3．6 冷冻稀释液中添加抗氧化剂对精子冷冻的影响

第四章 解冻精液指标检测与人工授精

4．1 活力检测

4．2 存活时间检测

4．3 顶体完整率检测

4．4 分离精子准确率检测

4．5 人工授精

4．6 数据统计

第五章 实验结果与讨论

5．1 试验结果

5．2 讨论

结论

参考文献

致谢