溶血磷脂酸在卵巢癌细胞迁移和增殖中的作用及其分子机理的研究

摘要

溶血磷脂酸(LPA)是一种具有生物活性的磷脂小分子，能够通过细胞膜表面的六个受体(LPA1-6)介导细胞信号转导调节一系列生理药理过程。如，能够参与细胞的增殖、迁移、黏附、凋亡、分化与分泌等，并与伤口愈合、肺纤维化、肿瘤发生与发展等病理过程密切相关。此外，已证实LPA已成为卵巢癌的早期生物标记物，并在患者的腹水内LPA高浓度积累，这对卵巢癌的发展有何作用及其机理是个有趣而未解决的科学问题。所以，本研究在发现LPA能促进卵巢癌细胞的增殖与迁移的基础上阐明了LPA在上述作用中参与的LPA受体亚型，并进一步弄清了其信号通路。研究结果为卵巢癌治疗战略中指出潜在的靶位点。因此，相关研究对于生理活性脂质的调控功能以及与肿瘤发展之间关系等众多的理论和实践方面具有重要意义。
　　实验过程中，我们利用CCK-8法测定细胞增殖、Micro chemotaxis chamber法测定细胞的迁移活性。采用Real Time PCR技术检测人卵巢癌细胞(A2780/HO8910)LPA受体表达谱，发现A2780和HO8910中LPA1/LPA3受体优先表达，用药理学方法验证了LPA1/LPA3受体参与细胞增殖和迁移，进一步用RNA干扰技术证明了LPA3是主要的参与受体。用特异性抑制剂确定G偶联蛋白为Gαi/o型偶联蛋白。在下游的信号通路研究中，用Western blot测定相关蛋白的表达，MAP激酶的特异性抑制剂确定了参与通路的MAPK类型为p38和ERK，参与的转录因子为NF-κB，而Bcl-2参与抗凋亡过程，同时也测得到MMP参与细胞的迁移机制。
　　结论
　　1、LPA是通过LPA3受体/Gαi/o-MAPK-p38/ERK-NF-κB-MMP促进细胞的迁移。
　　2、LPA通过LPA3受体的信号通路促进增殖。
　　我们结果提示，LPA3受体可以作为治疗卵巢癌的一个潜在的靶位点。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

引言

第一章 LPA促进卵巢癌细胞A2780和HO8910的增殖和迁移

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 人卵巢癌A2780和HO8910的培养

2．2 人卵巢癌细胞A2780和HO8910的细胞标准曲线

2．3 LPA刺激能够促进A2780和HO8910细胞迁移

2．4 LPA刺激能够促进A2780和HO8910细胞增殖

讨论

第二章 人卵巢癌细胞A2780／HO8910LPA受体表达情况及相关载体的筛选

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 人卵巢癌细胞A2780和HO8910中的LPA受体表达情况

2．2 LPA刺激卵巢癌细胞后受体表达变化

2．3 转染LPA1／LPA3过表达载体，检测卵巢癌细胞A2780和HO8910内LPA1／LPA3 mRNA表达量

2．4 转染LPA1／LPA3干扰载体，检测卵巢癌细胞A2780和HO8910内LPA1／LPA3 mRNA表达量

讨论

第三章 探索LPA介导的卵巢癌细胞A2780／HO8910增殖和迁移的信号通路

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 Ki16425抑制LPA促进细胞迁移

2．2 shRNA-LPA3能够解除LPA促进细胞迁移的作用

2．3 LPA对HO8910细胞MMPs／TIMP的mRNA表达的影响

2．4 PTX抑制LPA诱导的细胞迁移

2．5 shRNA-LPA3能够解除PTX抑制细胞迁移的作用

2．6 SB203580、PD98059抑制LPA促进细胞迁移的影响

2．7 BAY抑制LPA促进A2780和HO8910细胞迁移的作用

2．8 shRNA-LPA3能够解除LPA促进细胞增殖的作用

2．9 LPA能够促进卵巢癌A2780和HO8910细胞Bcl-2表达量的影响升高

2．10 EGF抑制剂AG1478对卵巢癌A2780和HO-8910细胞迁移的影响

讨论

结论

1、LPA能够促进卵巢癌细胞的增殖和迁移

2、卵巢癌细胞内LPA1／LPA3高表达

3、LPA是通过LPA3受体／Gαi／0-MAPK-p38／ERK-NF-κB-MMP促进细胞的迁移

4、LPA通过LPA3受体促进卵巢癌细胞的增殖

第四章 溶血磷脂酸对卵巢癌细胞影响的研究进展

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文