瘦素受体表达对HeLa细胞生物学功能影响的研究

摘要

宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤。目前已有的治疗手段，对中晚期病人效果不佳。研究发现，在肝癌、乳腺癌和星形胶质瘤中瘦素受体(Leptinrecepter，LEPR or CD295)对癌细胞的迁移能力、克隆形成能力和抗肿瘤药物耐受等生物学特征有影响[1-4]。
　　本课题主要探讨CD295蛋白对HeLa细胞生物学功能的影响。实验通过流式细胞仪表型检测和免疫荧光检测，发现CD295是HeLa细胞的一种膜表面蛋白;将CD295作为细胞筛选标志物，用流式仪细胞分选获得CD295+HeLa细胞。用CD295干扰质粒载体和空载体SD1211分别转染HeLa细胞，瞬时转染HeLa细胞用抗生素G418筛选建立CD295干扰质粒载体稳定转染细胞系(pGCsi-CD295)和空载体稳定转染细胞系(control)。
　　随后，本研究对CD295蛋白表达量不同的四种细胞系:CD295+HeLa细胞、pGCsi-CD295 HeLa细胞、未处理的HeLa细胞和空载体稳定转染细胞系(control)，进行了癌细胞生物学功能的差异性比较，包括通过平板克隆形成能力检测克隆形成能力、平板划痕检测迁移能力、Transwell侵袭小室检测细胞侵袭能力、MTT法检测细胞对紫杉醇的敏感性、流式细胞仪检测细胞周期变化等。实验结果显示，CD295的高表达使细胞具有更强的克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力、耐受肿瘤药物紫杉醇的能力、并显著影响HeLa细胞的细胞周期分布。由此我们推断CD295表达量增加会增强HeLa细胞的癌干性。

目录

声明

摘要

缩略词中英文对照表

第一章 癌症干细胞表面标志物研究进展(文献综述)

1．1 癌症干细胞的典型生物学特征

1．1．1 自我更新能力和异质性

1．1．2 致瘤性和转移能力

1．1．3 耐药性和射线抗性

1．2 癌症干细胞表面标志物的种类及其功能

1．3 问题与展望

第二章 瘦素受体表达对HeLa细胞生物学功能影响的研究

2．1 引言

2．2 实验材料与溶液配制

2．2．1 主要仪器设备

2．2．2 实验材料

2．2．3 主要实验试剂和耗材

2．2．4 主要试剂配制

2．3 实验方法

2．3．1 HeLa细胞的培养

2．3．2 检测CD295在HeLa细胞中的表达情况

2．3．3 CD295+ HeLa细胞的获得

2．3．4 稳定表达pGCsi-CD295的HeLa细胞的筛选

2．3．5 细胞增殖能力检测

2．3．6 克隆形成能力检测

2．3．7 迁移能力检测

2．3．8 侵袭能力检测

2．3．9 细胞周期检测

2．4 实验结果

2．4．1 HeLa细胞的培养

2．4．2 HeLa细胞表达CD295的情况

2．4．3 干扰质粒载体转染

2．4．4 高表达CD295使HeLa细胞克隆形成能力加强

2．4．5 高表达CD295使HeLa细胞迁移能力加强

2．4．6 高表达CD295使HeLa细胞侵袭能力加强

2．4．7 高表达CD295的HeLa细胞更耐受抗肿瘤药物紫杉醇

2．4．8 流式细胞仪检测结果显示CD295表达影响HeLa细胞周期分布

2．5 讨论

2．6 结论

参考文献

致谢