绵羊胚胎玻璃化冷冻方法及冷冻试剂的研究

摘要

试验1：首先利用小鼠胚胎进行冷冻试验，小鼠经超数排卵，取胚胎进行常规冷冻，每支细管装3枚左右的胚胎。在室温下，将胚胎直接放入装有无水乙醇的ET-1N型冷冻仪内，以3℃/分的速率降温至-6.5℃，诱发结冰，继续停留10分钟，然后以0.3℃/分的速率降温至-29.5℃，然后以0.1℃/分的速率降温至-33℃，取出胚胎细管，直接投入液氮中保存。 玻璃化细管法进行小鼠胚胎冷冻，试验利用EFS40玻璃化液冷冻小鼠胚胎，平衡2min后投入液氮中保存，解冻时在室温25℃水中进行解冻。轻轻振动约10s钟后取出。常规冷冻胚胎可利用率为35.85％，玻璃化冷冻胚胎可利用率为45.45％。 试验2：取经FSH超排的绵羊胚胎，经常规冷冻和玻璃化细管法以及开放式细管法(OPS法冷冻)，本研究应用EFS40和EDFS40玻璃化液对3～3.5日龄和6～6.5日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻，每支细管装2枚左右的胚胎。在现阶段国内外最新胚胎冷冻保存研究成果上，在绵羊胚胎上首次采用OPS法与传统细管法进行比较，玻璃化试剂EDFS40也首次在绵羊鲜胚中应用，并且EFS40和EDFS40玻璃化试剂对绵羊体内受精胚胎冷冻进行研究比较，解冻使用0.5M蔗糖或胚胎存放液脱出防冻剂，经形态学鉴定后移植到受体。 绵羊超排共回收104枚胚胎，胚胎形态完整数达85枚，其中常规冷冻法透明带完整率13/15(86.67％)，形态完整率10/13(76.92％)，妊娠率7/9(77.78％)，产子率3/7(42.85％)；一步细管法透明带完整率12/14(85.71％)，形态完整率10/12(83.33)，妊娠率6/9(66.67％)，，产子率2/6(33.33％)，二步细管法透明带完整率16/16(100％)，形态完整率13/16(81.25％)，妊娠率9/11(81.81％)，产子率5/9(55.56％)；OPS法透明带完整率27/27(100％)，形态完整率22/27(81.48％)，妊娠率15/20(75％)，产子率8/15(53.33％)。 本试验研究表明：绵羊胚胎应用EFS40和EDFS40玻璃化液冷冻，解冻后利用蔗糖或胚胎存放液脱除保护剂，经鉴定移植得到较高的妊娠率和胚胎存活率。并且在绵羊体内受精胚胎上首次采用OPS开放式细管法进行胚胎冷冻，也取得很好的效果。玻璃化冷冻技术不需要特殊的冷冻仪设备，并且操作程序简单、省时，该过程不必由专业技术人员进行操作，且脱除抗冻剂的解冻液配制比较简单，使用效果好、利于在现场条件下操作，与传统胚胎冷冻方法相比具有明显优势，有利于加速绵羊品种改良。

目录

独创性声明及关于论文使用授权的说明

摘要

前 言

文献综述

第一章：小鼠胚胎冷冻方法的探讨(预试验)

第二章：绵羊胚胎冷冻技术的研究

参考文献

致谢

硕士期间发表论文