抗菌药物联合应用对MRSA体外抗菌活性研究

摘要

前言：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)是目前医院感染的重要病原菌之一，1961年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌首先在英国检出，以后MRSA在全世界的医疗组织中传播。2001年美国的一项研究表明MRSA感染已约占医院感染的25％。MRSA造成的感染发病率在我国也呈逐年上升趋势，同时MRSA不再仅从医院获得，社区获得性MRSA(Community-acquiredMRSA，C-MRSA)感染也同样常见。MRSA对包括氨基糖苷类、四环素、磺胺类、利福平都可产生不同程度的耐药。目前，糖肽类抗菌药物万古霉素、替考拉宁仍然是治疗MRSA的最有效药物。自从日本报道了全球第一例万古霉素敏感性降低的金黄色葡萄球菌，这种情况有所改变。2002年6月在美国又报道了第一例万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌(Vancomycin-resistantStaphylococcusaureus，VRSA)。国内研究中也有对万古霉素、替考拉宁中介敏感的金黄色葡萄球菌报道。MRSA感染被列为世界范围内的三大最难解决的感染性疾病之一，成为各国研究的热题。由于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性越来越严重，特别是国外已出现异质性耐万古霉素葡萄球菌菌株，尽管病例很少，但已引起人们的广泛关注。我们对从临床各类感染标本中分离的30株MRSA做了万古霉素分别与利福平、左氧氟沙星及替考拉宁分别与利福平、左氧氟沙星的体外联合抑菌试验，为临床有效地治疗MRSA感染提供实验室依据。 材料和方法：材料30株MRSA来自2003年11月至2006年2月中国医科大学附属第一医院住院及门诊病人的各类感染标本。抗菌药物：万古霉素(Vancomycin)，美国Lilly公司；替考拉宁(Teicoplanin)，Aventis公司；利福平(Rifampin)，沈阳双鼎制药有限公司；左氧氟沙星(Levofloxacin)，北京第一制药厂。 标准质控菌株ATCC29213，由中国医科大学附属第一医院细菌室提供。Muller-Hinton(MH)琼脂购于北京奥博星生物技术有限公司，Muller-Hinton(MH)肉汤购于美国BBL公司。仪器：VITEK-2全自动微生物分析仪(法国生物梅里埃公司)；比浊仪(英国OXOID公司)；96孔平板(国产)。 方法常规方法培养分离细菌，用VITEK-2微生物自动分析仪鉴定为金黄色葡萄球菌。MRSA鉴定根据美国NCCLS标准应用微量肉汤稀释法，用苯唑西林测定分离的金黄色葡萄球菌MIC值，判定结果苯唑西林MIC≥4μg/ml，定为MRSA菌株。药敏试验采用微量肉汤稀释法。将万古霉素和替考拉宁用灭菌2mlMH肉汤倍比稀释成11个浓度，分别为64、32、…、0.063μg/ml；将左氧氟沙星、利福平用灭菌2mlMH肉汤倍比稀释成11个浓度，512、256、…0.5μg/ml。在进行棋盘法之前，先测定四种抗菌药物单独应用对受试菌的MIC值。单药应用对MRSA的MIC测定：将浓度为1×106CFU/ml的菌悬液100μl加入孔中，再加入抗菌药物100μl，放入35℃温箱中过夜培养，18-24小时观察结果。联合药敏试验：按棋盘法设计，将浓度为1×106cfu/ml的菌液100μl加入孔中，再将每种抗菌药物取50μl加入孔中，两两组合加入96孔平板中，放入35℃温箱中过夜孵育，18-24小时观察结果。记录单独应用药物时的最低抑菌浓度MIC甲药单用和MIC乙药单用，及两药联合应用时各自的MIC甲药联用和MIC乙药联用，以计算FIC指数(Fractionalinhibitoryconcentrationindex)，即部分抑菌浓度指数。 结果万古霉素对30株MRSA的MIC范围为0.25-4μg/ml、MIC90为1μg/ml，替考拉宁对30株MRSA的MIC范围为0.5-8μg/ml、MIC90为4μg/ml，万古霉素与利福平联合应用MIC90降为0.5μg/ml、与左氧氟沙星联合应用MIC90降为0.5μg/ml；替考拉宁与利福平联合应用MIC90降为2μg/ml，与左氧氟沙星联合应用MIC90降为2μg/ml。 讨论万古霉素、替考拉宁均是糖肽类抗菌药物，主要用于治疗革兰阳性细菌的感染，是目前临床上为数不多的仍对多重耐药葡萄球菌和肠球菌具有抗菌活性的药物。在体外试验和动物模型中已经证实二者抗菌活性相似。利福平可以用于治疗MRSA的感染，但常常需联合应用糖肽类药物或其他抗生素，可能阻止利福平耐药性的出现。氟喹诺酮类药物以往对MRSA的抑菌率高达98.1％，但是由于国内广泛使用，对MRSA的敏感性明显下降。本实验中，万古霉素、替考拉宁对30株MRSA的抑菌率均为100％；利福平单用的抑菌率仅30％；左氧氟沙星对30株MRSA均耐药。万古霉素、替考拉宁分别联合应用利福平或左氧氟沙星后，抗菌活性提高。利福平和左氧氟沙星抗菌活性也明显提高。万古霉素、替考拉宁与利福平联合应用以协同作用为主，万古霉素、替考拉宁与左氧氟沙星联合应用以协同和相加作用为主。临床上治疗由MRSA引起的重症感染，可根据药敏试验结果采用糖肽类与利福平、左氧氟沙星等抗菌药物联合应用。 结论1.万古霉素、替考拉宁与利福平联合应用以协同作用为主，万古霉素、替考拉宁与左氧氟沙星联合应用以协同和相加作用为主，二者均无拮抗作用。 2.临床上治疗由MRSA引起的重症感染，可根据药敏试验结果采用糖肽类与利福平、左氧氟沙星等抗菌药物联合应用。

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中文论著摘要

英文论著摘要

英文缩略语

前 言

实验材料

实验方法

实验结果

讨 论

结 论

本研究创新性自我评价

参考文献：

综 述耐甲氧西林及金黄色葡萄球菌与抗生素治疗的研究近况

在学期间科研成绩

致 谢

个人简历