替考拉宁眼内药动学及对MRSA体外抗菌活性研究

摘要

替考拉宁与万古霉素、去甲万古霉素均属于糖肽类抗生素。替考拉宁在临床上主要用于治疗各种严重的革兰阳性菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Meticillin-resistant Staphylococcus aurcus,MRSA)等耐药菌引起的感染。替考拉宁由于其化学结构上增加了脂肪侧链,相对分子质量增高,在药代动力学方面显示出良好的特性。如:具有组织穿透性强、能在细胞内浓集、半衰期也明显延长等特点。替考拉宁与万古霉素相比,除静脉给药外也可进行肌内注射给药。另据文献报道:替考拉宁对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aurcus,SA)引起的感染性疾病的治疗作用比万古霉素更强,人对注射用替考拉宁耐受性良好,不良反应一般轻微且短暂,很少需要中断治疗,严重不良反应罕见,且不良反应少于万古霉素,与氨基糖苷类药物联用对肾功能损害也较轻微。
　　 替考拉宁在临床上用于治疗各种耐药菌引起的皮肤和软组织感染、呼吸道感染、泌尿道感染、骨和关节感染、败血症、心内膜炎及持续不卧床腹膜透析相关性腹膜炎等疾病。注射用替考拉宁也可在矫形手术、具有革兰阳性菌感染的高危因素时的预防用药。但是替考拉宁在眼科尤其是眼内炎治疗上的应用情况,文献报道甚少。由于眼部存在血.眼屏障,全身给药时药物很难在眼球内达到有效浓度,因此大多数眼病的治疗常采用局部给药。将药物直接注入玻璃体能很好的控制眼内炎症,且用药剂量小。本课题基于以上理论和替考拉宁自身的优点,探讨兔眼玻璃体腔内注射替考拉宁眼内药代动力学过程及特点,测定替考拉宁在玻璃体、房水中浓度,制定合理的给药剂量以及比较替考拉宁、万古霉素及去甲万古霉素对MRSA体外抗菌活性,为临床治疗眼病尤其是MRSA感染眼内炎选择更为合适的药物提供实验依据。
　　 方法：
　　 日本大耳白兔33只,随机分成11组,每组3只。玻璃体腔注射0.50mg／0.1ml替考拉宁后,分别于0、0.25、0.5、1、2、4、6、12、24、48、96、192小时,抽取玻璃体、房水各约0.1ml。采用微生物法测定替考拉宁浓度,并应用药动学软件3P97计算相关药动学参数。
　　 采用K-B纸片琼脂扩散法和MecA基因PCR检测两种方法鉴定MRSA临床分离株。肉汤稀释法测定替考拉宁、万古霉素及去甲万古霉素对MRSA体外MIC／MBC值,并计算MIC90、MIC50。以药物与细菌作用时间为横坐标,以各菌株各时间点菌落数的对数值(mean±s)为纵坐标,绘制时间-杀菌曲线。对以上三种药物各时间点的菌落数进行单因素方差分析,比较这三种药物体外抗MRSA活性是否存在显著性差异。
　　 结果
　　 1替考拉宁标准品标准曲线回归方程1为:y=0.174x-0.8131,R2=0.9991(n=5),在1.00mg／L～80.00mg／L浓度范围内线性关系良好。回归方程2为:y=0.1738x-0.804,R2=0.9995(n=5),在100.00mg／L～350.00mg／L浓度范围内线性关系良好。
　　 2替考拉宁玻璃体腔单次注射符合开放性二室模型,在中央室(玻璃体)迅速分布,并逐渐向外周室(房水、视网膜等组织)弥散。替考拉宁在玻璃体没有吸收相,只有分布、消除相。15分钟测得替考拉宁浓度为358.47±21.53mg／L,192小时仍为4.38±0.68mg／L。替考拉宁在房水中有吸收相、分相布及消除相。峰浓度为102.17±9.54mg／L,192小时浓度为2.38±0.38mg／L。
　　 3替考拉宁眼内药动学参数。替考拉宁在玻璃体内的半衰期t1／2α与t1／2β分别为1.68h、152.15h,曲线下面积AUC(0-t)为259.94mg／L·h、AUC(0-∞)为413.68mg／L·h,清除率CL为0.001L·h-1,速率常数K1-2与K2-1分别为0.006min-1、0.373min-1。替考拉宁在房水的半衰期t1／2α与t1／2β分别为2.83h、70.56h,曲线下面积AUC(0-t)为168.26mg／L·h、AUC(0-∞)为245.049mg／L·h,清除率CL为0.002／L·h-1,速率常数K1-2与K2-1分别为0.096min-1、1.409min-1。
　　 4替考拉宁对MRSA体外MIC／MBC分别为0.5～1.0mg／L、1.0～2.0mg／L,MIC50为0.49mg／L,MIC90为0.70mg／L。万古霉素对MRSA体外MIC／MBC分别为0.5～2.0mg／L、1.0～4.0mg／L,MIC50为0.62mg／L,MIC90为0.8mg／L。去甲万古霉素对MRSA体外MIC／MBC分别为1～2mg／L、8～16mg／L,MIC50为1.25mg／L,MICgo为1.91mg／L。
　　 5替考拉宁、万古霉素及去甲万古霉素对MRSA体外抗菌活性。对这三种药物不同作用时间点的菌落数,进行单因素方差分析。结果显示,这三种药物在高、中、低三种浓度剂量下都较空白对照组,显示了一定的抗菌活性(P<0.05)。当药物浓度为100mg／L时,替考拉宁与万古霉素在10小时的菌落计数差异无显著性(P>0.05),替考拉宁与去甲万古霉素在10小时的菌落计数差异无显著性(P>0.05)。当药物浓度为10mg／L时,替考拉宁与万古霉素在10小时的菌落计数差异无显著性(P>0.05),替考拉宁与去甲万古霉素在10小时的菌落计数存在显著性差异(P<0.05)。当浓度为1mg／L时,三种抗菌药物对MRSA的生长,有一定的抑制作用,但均不能够完全抑制。其中以替考拉宁的抑制作用最强,万古霉素次之,去甲万古霉素最弱。此时,替考拉宁、万古霉素与去甲万古霉素对MRSA的抗菌活性均存在显著性差异(P<0.05)。
　　 小结
　　 替考拉宁玻璃体腔单次注射,符合开放性二室模型。替考拉宁玻璃体腔注射一次即可维持较长时间(约192小时)的药物治疗浓度。
　　 替考拉宁在玻璃体、房水内的药动学参数:替考拉宁在玻璃体内的半衰期t1／2α与t1／2β分别为1.68h、152.15h。替考拉宁在房水的半衰期t1／2α与t1／2β分别为2.83h、70.56h。
　　 MRSA对替考拉宁、万古霉素及去甲万古霉素三种药物均敏感。替考拉宁抗MRSA活性大于万古霉素及去甲万古霉素,存在显著性差异。