组织工程骨用于促进犬牙槽骨再生的实验研究

摘要

目的： 选用骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymfl stem cells，BMSCs)作为种子细胞， Bio-Oss小牛无机骨粉作为支架材料，构建组织工程化骨，探讨应用组织工程技术，结合Bio-Gide胶原膜促进犬牙槽骨再生的可行性。 方法: 1．体外分离培养，成骨诱导扩增犬BMSCs，将第三代细胞复合Bio-Oss小牛无机骨粉，构建组织工程化骨。 2．细胞培养过程中，倒置相差显微镜观察。 3．术前3个月拔除3只犬第二前磨牙。手术时在缺牙区人工制造三壁骨缺损，然后将12个人工制造的骨缺损区随机分为2组，实验组：植入组织工程化骨，结合Bio-Gide胶原膜，间断缝合牙龈组织；对照组：单纯植入Bio-Oss骨粉，结合Bio-Gide胶原膜，间断缝合牙龈组织；实验组和对照组缝合后均放置牙周塞制剂，术后3天常规抗炎治疗，术后14天拆除塞制剂。 4．分别在术前即刻，术后2周，4周和8周进行影像学检查，术后8周做组织学检查，通过HE和Masson两种染色方法来评价牙周骨缺损的再生效果。 结果: 1、所有实验动物无一例死亡，术后饮食正常。缺损处伤口愈合良好，无红肿及感染，无移植物排出。 2、倒置相差显微镜下观察原代培养第10天的BMSCs呈漩涡状排列，铺满整个培养瓶表面，融合达70％～80％。 3、术前，观察实验组和对照组的X-ray影像，可见两组拔牙创均已完全骨性愈合，骨质密度相同． 4、术后2周，实验组和对照组X-ray无明显区别。术后4周，实验组：X-ray可见骨缺损区有新骨形成，缺损区阴影变浅，可见正常骨小梁结构，Bio-Oss骨粉部分吸收；对照组骨缺损区有少量新骨形成，边缘模糊。术后8周，实验组缺损区新生骨骨量明显增加，Bio-Oss材料已经完全吸收，缺损区被正常骨小梁结构所覆盖，密度与缺损区周围骨相接近，骨缺损区密度增高，阴影消失；对照组骨缺损区阴影变浅，可见正常骨小梁结构。 5、术后8周组织切片检查，实验组建立了正常的钙化骨结构，胶原膜结构成分已消失，新生牙槽骨己充满骨缺损处，牙槽骨骨小梁细小、多空腔且呈团状，新生牙槽骨骨化效果明显优于对照组，胶原Masson染色为红色，其钙化程度近似于正常牙槽骨；对照组新生牙槽骨尚未充满骨缺损处，牙槽骨骨小梁细小、多空腔且凌乱，虽然建立了正常的骨结构，但钙化程度极低，基本为胶原性骨结构，Masson染色为蓝绿色。 结论: 选用BMSCs作为种子细胞， Bio-Oss小牛无机骨粉作为支架材料，构建组织工程化骨，应用组织工程技术，结合Bio-Gide胶原膜促进犬牙槽骨再生是可行性的，且实验组牙槽骨的生长速度明显快于对照组。

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结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

附录综述 牙周骨组织工程的研究进展

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