BMP 9转染的hPDLSCs与H A-TCP支架复合体促进牙槽骨再生的实验研究

摘要

目的 探索骨形成蛋白9(BMP9)重组腺病毒(Ad-BMP9)转染的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)与羟基磷灰石磷酸三钙(HA-TCP)支架材料复合体在牙周组织再生中的研究.方法 实验分3组,Ad-BMP9组(转染Ad-BMP9载体)、对照组(转染携带GFP荧光蛋白的空载体腺病毒Ad-GFP)和空白对照组(加入PBS),实时荧光定量PCR(RT-PCR)、Western blot检测BMP9 mRNA及蛋白水平;碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性分析、茜素红染色、茜素红半定量分析检测BMP9调节hPDLSCs的早、晚期成骨分化能力.扫描电镜(SEM)观察Ad-BMP9组hPDLSCs在HA-TCP上的黏附增殖情况.Ad-BMP9/hPDLSCs复合HA-TCP支架材料后,检测ALP活性,RT-PCR检测复合体早、晚期成骨能力.将Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体植入裸鼠皮下及大鼠牙周缺损区,组织学分析新骨形成水平.结果 Ad-BMP9转染hPDLSCs后,BMP9表达较其他两组明显升高.ALP染色、ALP活性分析、茜素红染色、茜素红半定量分析发现Ad-BMP9组的早期和晚期成骨分化能力均明显高于其他两组(P<0.05).SEM观察结果显示Ad-BMP9组hPDLSCs能在HA-TCP上正常黏附、生长、增殖.与Ad-GFP/hPDLSCs/HA-TCP组及hPDLSCs/HA-TCP组比较,Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP组的ALP活性明显增高(P<0.05);早期成骨标志物ALP中、中晚期成骨标志物骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)表达均明显提高(P<0.05).Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体应用于体内实验,组织学分析证明有更多新骨形成.结论 Ad-BMP9/hPDLSCs/HA-TCP复合体能促进新骨形成,修复牙槽骨缺损.