福辛普利抑制肾小球系膜细胞增殖的机制研究

摘要

目的： 肾小球硬化是肾小球肾炎最常见的病理类型之一，是各种原因导致肾小球损伤出现的共同结果，其实质为肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质增多，控制肾小球系膜细胞的增殖对于肾小球损伤的逆转和防止肾小球疾病的慢性演变有重要意义。核因子-kB(nuclear factor-kappa B，NF-kB)作为一种普遍存在的转录因子，在多种炎症介质的表达调控中起关键作用。可调节各种免疫功能、细胞增殖及凋亡在内的分子基因表达。正常情况下，NF-kB与抑制因子kB(I kappa B，IkB)结合形成三聚体复合物存在于胞浆中，当细胞受到各种刺激时，IkB发生快速泛蛋白化及蛋白酶解,NF-kB即被活化，并很快易位到核，与靶基因的启动子区域kB基因序列结合，启动基因的转录和蛋白[如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis faetor-α,TNF-α)]合成。有研究表明血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)类药物可以通过NF-kB/IkB途径抑制TNF-a的生成，从而抑制系膜细胞的增殖。本研究用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激，观察福辛普利(fosinopfil,FOS)对肾小球系膜细胞中IkBa、NF-kBp65、TNF-α的影响，以探讨福辛普利抑制肾小球系膜细胞增殖的机制，为福辛普利的肾脏保护作用提供理论依据。 实验材料与方法： 1、在无菌室中进行大鼠系膜细胞的复苏，培养，传代。 2、实验分组。 3、取生长较好的第四代系膜细胞，接种于六孔板，加盖玻片。培养24小时后系膜细胞长满玻片，按上述分组方法加药，继续培养48小时。MTT法测系膜细胞增殖。 4、依照说明书对玻片进行SABC免疫组化染色。 5、应用计算机图象分析系统通过显微镜对玻片进行IkBa和TNF-α定量分析。 6、细胞NF-kBp65活化情况：计算阳性细胞(细胞核着色者为阳性)在整个细胞中所占比例，即核移位百分率。 结果： 1、福辛普利对系膜细胞中IkBa表达的影响免疫组化检测胞浆内IkBa水平表明，LPS刺激后系膜细胞胞浆内IkBa明显低于正常对照组(p<0.01)，而LPS+FOS组细胞胞浆内lkBix明显高于脂多糖组(p<0.05)，二者具有统计学意义，表明FOS的加入可以抑制胞浆中IkBa的降解，且随着福辛普利剂量的增加，IkBa降解减少(p<0.05)。 2、福辛普利对肾小球系膜细胞NF-kB p65活化的影响对照组系膜细胞NF-kBp65大部分核空染，胞浆着色。而LPS刺激后核染色阳性细胞明显增多，表明发生核移位现象，与对照组相比有显著差异(p<0.01)。LPS+FOS处理组的NF-kBp65阳性细胞数与脂多糖组相比明显减低，有统计学意义(P<0.05)。且随着福辛普利剂量的增加阳性细胞数减少(p<0.05)。 3、福辛普利对系膜细胞TNF-a表达的影响基础状态下，系膜细胞胞浆内TNF-a含量较低，LPS可显著上调TNF-a的表达(p<0.01)，FOS的加入可明显下调LPS诱导的TNF-a表达(p<0.05)，另外在一定浓度范围内呈剂量依赖性(p<0.05)。 结论： 1、FOS可以改变系膜细胞胞浆中IkBa含量，NF-kBp65的活化，及TNF-a含量的变化，提示FOS是通过NF-kB/IkB信号转导途径抑制TNF-a的表达，从而抑制肾小球系膜细胞增殖的。 2、FOS抑制系膜细胞增殖在一定范围内是呈剂量依赖性的。

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实验材料与方法

实验结果

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结论

本研究创新的自我评价

参考文献

综述 NF-κB的结构和功能研究

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