成釉细胞瘤端粒长度及与hTERT表达相关性的研究

摘要

目的：端粒由DNA重复序列和特定的端粒结合蛋白相结合而形成的核染色质组成，防止染色体融合，重组及降解，维持其完整性和稳定性。端粒的短缩及端粒的失能会导致染色体末端发生融合及重组，增加基因的不稳定，从而引发肿瘤的形成。端粒酶是一种细胞核糖核蛋白逆转录酶，能延长端粒长度，维持端粒的稳定和染色体的完整。端粒酶激活是细胞永生化和恶变的重要一环，近乎90％的肿瘤中都有端粒酶的激活。本研究采用荧光原位杂交技术对成釉细胞瘤进行端粒长度的检测，并探讨其与hTERT及成釉细胞瘤生物学行为的关系。 方法：①荧光原位杂交：石蜡切片经常规脱蜡、水化，抗原修复，蛋白酶K消化后乙醇脱水，滴加杂交液，盖玻片覆盖，90℃共变性，室温避光杂交，DAPI复染细胞核后甘油封片。②hTERT免疫组化：石蜡切片经脱腊、水化，过氧化氢封闭后抗原修复，马血清封闭后，一抗过夜，二抗1h，三抗SP—AP1h，NBT—BCIP显色，甲基绿复染。③ki67免疫组化：石蜡切片经脱蜡水化，抗原修复。一抗鼠抗人ki67核抗原单克隆抗体及LSABTM+/HRP试剂盒购自Dako公司，DAB显色。④采用SPSS11.0统计软件包进行X2检验，方差分析及Pearson相关分析，检验水准a=0.05，p<0.05为有统计学意义。 结果：⑴荧光原位杂交分析结果表明，89例成釉细胞瘤上皮细胞端粒平均长度为0.1260，12例口腔鳞癌上皮细胞端粒平均长度为0.0487，10例正常口腔粘膜上皮细胞的端粒平均长度为0.2105，组间比较有统计学差异(F=8.965，P=0.000)。⑵89例成釉细胞瘤中64例hTERT均为阳性，表达率为71.9％，阳性表达以中度为主，主要位于外周柱状细胞或立方状细胞中，且在胞核及胞浆呈弥散分布。与成釉细胞瘤相比，10例口腔正常粘膜中除2例hTERT呈中度表达外，其余8例均为阴性，12例口腔鳞癌hTERT表达均为阳性，三组hTERT阳性率及表达强度具显著统计学差异(X2=154.459，P=0.000；X2=111.486，P=0.000)。按生物学行为分组，随成釉细胞瘤的复发与恶变hTERT阳性率增高，64.7％(33/51)的原发组hTERT为阳性，78.8％(26/33)的复发组hTERT为阳性，100％(5/5)的恶变组hTERT为阳性，且这一差异具有统计学意义(X2=32.517，P=0.000)，三组hTERT表达强度之间亦具显著差异(X2=55.202，P=0.000)。⑶按hTERT的表达强度对将成釉细胞瘤分为三组，hTERT(—)组端粒平均长度为0.097，hTERT(+)组端粒平均长度为0.136，hTERT(++)组端粒平均长度为0.140，随着hTERT表达的增强，端粒长度有增长的趋势，但这一差异无统计学意义(F=1.984，P=0.144)。⑷ki67阳性染色的部位为细胞核，呈深棕色或深褐色，阳性染色细胞以肿瘤上皮细胞为主，星网状细胞阳性染色相对较少，间质细胞偶有阳性表达。不同组织学类型成釉细胞瘤中ki67表达无差异(F=0.762，P=0.520)。ki67的表达与端粒长度呈现负相关的趋势(r=-0.151，P=0.231)。伴随成釉细胞瘤的复发与恶变，ki67的表达增强(F=4.344，P=0.017)，且与hTERT的表达趋势一致，相关分析表明ki67与hTERT间存在相关(r=0.282，P=0.023)。在复发成釉细胞瘤中，刮治复发组ki67LI平均值为7.10±5.34，切除复发组ki67LI平均值为0.74±0.69，组间差异具统计学意义(F=6.981，P=0.030)。 结论：成釉细胞瘤中端粒的短缩和hTERT的表达可能与成釉细胞瘤的生物学行为相关，且成釉细胞瘤中可能存在非端粒酶依赖的端粒延长机制。

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综述 端粒长度和端粒酶活性在肿瘤中的双重作用

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