不同来源幽门螺杆菌对蒙古沙土鼠胃粘膜损伤作用及其机制的研究

摘要

大量流行病学研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．Pylori)感染与多种胃疾病，如急性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化生、消化性溃疡、粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤及胃癌的发病相关联。1994年世界卫生组织国际癌症研究署(IARC)以1991年报道的三项前瞻性病例—对照研究为基础将H．Pylori定义为Ⅰ类致癌物。 流行病学调查资料显示，辽宁庄河地区胃癌死亡率波动在45.21/10万～63.29/10万之间，占当地全死因的8.25％，占肿瘤死亡的38.94％，均高于全国平均水平，属于我国北方胃癌高发区。并且庄河H．Pylori感染高发。 我室前期研究发现，食用盐腌咸猪肉和H．Pylori感染是当地胃癌高发的主要饮食因素和环境因素。我室已成功从咸猪肉中培养出H．Pylori，即肉源性H．Pylori。体外研究证明，与人源性H．Pylori相比，肉源性H．Pylori可对人胃上皮细胞GES—1造成更严重的损伤。 建立合适的H．Pylori感染动物模型对于揭示其可能的致病机制十分必要。目前研究表明慢性H．Pylori感染的蒙古沙土鼠发生胃炎、胃溃疡、胃癌等病理组织学改变与人类相似。那么，不同来源H．Pylori感染蒙古沙土鼠后，在胃粘膜的定植能力如何？它们能否导致胃粘膜的损伤？损伤程度是否存在差异？其机制如何？以上问题均有待研究。 本研究应用肉源性H．Pylori及其他人源性H．Pylori感染蒙古沙土鼠，观察并比较不同来源H．Pylori在蒙古沙土鼠胃粘膜的定植能力及对胃粘膜的损伤作用，深入探讨导致损伤差异的机制，为进一步探讨H．Pylori的致病性及其机制提供实验依据。 方法： 1、建立不同来源H．Pylori感染的蒙古沙土鼠模型 经灌胃接种H．Pylori感染MGs。分别在感染13周、26周、52周进行解剖。 2、不同来源H．Pylori定植能力判定 (1)不同来源H．Pylori定植的定性判定 对蒙古沙土鼠胃粘膜进行苏木素—伊红(Hematoxylin and Eosin Staining，HE)染色、Warthin—Starry(W—S)银染色、Grams染色、尿素酶培养基检测、脑心浸液琼脂培养基培养、聚合酶链反应(PCR)等方法鉴定H．Pylori感染。PCR扩增结果与灌胃前H．Pylori的PCR扩增结果进行对比，确定蒙古沙土鼠感染的H．Pylori是否为灌胃用的H．Pylori菌株。 (2)不同来源H．Pylori定植能力定量判定 利用胃粘膜匀浆培养H．Pylori菌落计数比较不同来源H．Pylori在胃粘膜的定植能力。 3、观察不同来源H．Pylori对胃粘膜损伤作用 石蜡切片HE染色病理组织学胃疾病诊断比较不同来源H．Pylori对胃粘膜损伤作用。 4、探讨不同来源H．Pylori对胃粘膜损伤作用的机制 (1)免疫组织化学方法检测Interleukin—8(IL—8)、核转录因子(nuclear factor kappaB，NF—κB)蛋白表达。 (2)Western Blot检测新鲜胃粘膜IL—8、NF—κB蛋白的表达。 (3)RT-PCR检测新鲜胃粘膜IL—8、NF—κB mRNA的表达。 结果： 1、肉源性H．Pylori可以在MGs胃粘膜定植，检出率为100％。 2、不同来源H．Pylori在MGs胃粘膜的定植能力有差异，肉源性H．Pylori在MGs胃粘膜定植密度高于人源性H．Pylori(P<0.01)。 3、不同来源H．Pylori导致MGs胃粘膜的损伤作用有差异，肉源性H．Pylori可以导致MGs更严重的胃粘膜损伤(P<0.05)。 4、H．Pylori伴有高盐饮食比单纯H．Pylori导致MGs更严重的胃粘膜损伤(P<0.05)。 5、NF—κB p65蛋白及mRNA表达在肉源性H．Pylori组的表达高于人源性H．Pylori组(P<0.05)。 6、IL—8蛋白及mRNA表达在肉源性H．Pylori组的表达高于人源性H．Pylori组(P<0.05)。 7、NF—κB p65表达与H．Pylori定植密度有显著相关性(P<0.05)。 8、IL—8表达与H．Pylori定植密度有显著相关性(P<0.05)。 9、IL—8表达与NF—κB p65表达有显著相关性(P<0.05)。 10、NF—κB p65蛋白及mRNA表达在H．Pylori伴有高盐饮食组的表达高于单纯H．Pylori感染组(P<0.05)。 11、IL—8蛋白及mRNA表达在H．Pylori伴有高盐饮食组的表达高于单纯H．Pylori感染组(P<0.05)。 结论： 1、肉源性H．Pylori可以在MGs胃粘膜定植并导致其胃粘膜损伤。 2、与人源性H．Pylor比较，肉源性H．Pylori在MGs胃粘膜定植能力更强，并可以导致更严重的胃粘膜损伤。 3、与单纯H．Pylori感染比较，H．Pylori感染伴有高盐饮食可以导致MGs更严重的胃粘膜损伤。 4、肉源性H．Pylori感染MGs后，可以活化NF—κB p65，从而上调IL—8的表达，导致蒙古沙土鼠更严重的胃粘膜损伤。 5、在高盐条件下，H．Pylori感染可以活化NF—κB p65，从而上调IL—8的表达，可能是H．Pylori感染伴有高盐饮食导致MGs更严重胃粘膜损伤的机制之一。

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论文说明：英文缩略语

声明

论文一不同来源H.pylori在蒙古沙土鼠胃粘膜定植能力的研究

前言

材料与方法

结果

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结论

参考文献

论文二不同来源H.pylori对蒙古沙土鼠胃粘膜损伤作用的研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

论文三不同来源H.pylori对蒙古沙土鼠胃粘膜损伤作用机制的研究

前言

材料与方法

结果

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结论

参考文献

本研究创新性自我评价

综述：幽门螺杆菌感染蒙古沙土鼠模型在胃癌研究中的应用

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