牛膝多糖对树突状细胞表型及功能成熟影响

摘要

牛膝，为苋科牛膝属的植物。分布于非洲、俄罗斯、越南、印度、马来西亚、菲律宾、朝鲜以及中国等地，生长于海拔200米至1，750米的地区，常生长在山坡林下，用药已有近千年历史。牛膝多糖(Achyranthes Bidentata Polysaccharides，ABP)是采用现代提取技术从牛膝中纯化的分子量1400D多糖，为国家九五攻关项目中唯一的中药项目。ABP通过与多种免疫细胞上受体结合发挥免疫调节作用并有抗肿瘤、抗衰老、抗凝血保肝和抗病毒等功能。
　　 树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前已知的功能最为强大的专职抗原提呈细胞；未成熟DC在机体的外周组织中捕获和加工抗原，然后开始向淋巴器官转移，并渐进式成熟，与此同时DC表面重要的功能分子表达增加，并激活初始T细胞，引发应答，参与机体多种自身免疫性疾病、免疫缺陷病、肿瘤及一些炎症反应的病理过程，在机体的抗感染免疫及肿瘤免疫应答过程中起着极其重要的作用，也是基础与临床研究的热点之一。然而，虽然ABP在免疫系统中的显著调节作用已被确认，但是却没有关于ABP作用于DC的相关报道。本研究旨在探讨ABP对小鼠髓系DC细胞株成熟促进、表型改变及功能变化等方面的影响。
　　 方法：
　　 采用本教研室保存并传代的C57BL/6小鼠髓系DC2.4细胞株进行实验，复苏培养细胞，应用MTS法、细胞免疫组化、扫描电镜技术、透射电镜技术、4-氨基安替比林(4-AAP)比色法、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验等检测DC表型、结构和功能的各项指标。
　　 结果：
　　 1、细胞培养：细胞稳定传代培养后，幼稚DC24小时后趋向成熟。
　　 2、MTS法：1.5×10-4mg/ml～5mg/ml浓度作用DC较RPMI1640对照组的DC24h后明显增殖，且有浓度依赖性，在0.01mg／ml出现峰值。
　　 3、扫描电镜：经ABP刺激后，DC表面突起较正常对照组明显增多，这是DC趋向成熟的标志之一。
　　 4、透射电镜：经ABP刺激后，DC体内溶酶体的数量明显减少。因为DC吞噬加工抗原需要溶酶体的参与，所以溶酶体数量的减少说明DC趋向成熟，吞噬加工抗原的能力减弱。
　　 5、细胞免疫组化：DAB试剂盒染色，苏木素复染后在光学显微镜下观察，可见对照组DC的吞噬加工辣根过氧化物酶的数量明显比ABP刺激组多，说明ABP作用组的DC吞噬加工抗原的能力减弱，细胞趋向成熟。
　　 6、4-氨基安替比林(4-AAP)比色法：与RPMI1640组相比，ABP组酸性磷酸酶活性均下降，差异有统计学意义。
　　 7、ELISA检测IL-12的含量：与RPMI1640组相比，LPS和ABP作用后的DC的培养液上清中IL-12的含量明显增高，差异有统计学意义。
　　 8、流式细胞术检测DC表面CD40+，CD86+，MHCⅡ类分子：与RPMI1640组相比，ABP组和LPS组刺激DC后所表达的CD40+，CD86+和MHCⅡ类分子均明显增高，差异有统计学意义。
　　 结论：
　　 1、适宜浓度的ABP显著促进DC形态和功能的成熟。
　　 2、ABP对DC的增殖作用最佳浓度是0.01mg／ml。

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英文缩略语

论文 牛膝多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

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材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 牛膝多糖免疫调节

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