紫草素对寻常型银屑病患者外周血单个核细胞产生IFN-r、IL-4的影响

摘要

前言：
　　 银屑病是一种常见的易于复发的慢性炎症性疾病,其组织病理改变的三大特点为角质细胞过度增生、炎症细胞浸润、新生血管生成。研究发现银屑病存在Th1细胞分化偏态性,表现为银屑病患者外周血T细胞培养上清中Th1细胞因子IFN-γ的明显增高以及银屑病患者皮损T细胞内IFN-γ mRNA的过度表达,且IFN-γ的含量与PASI呈明显正相关,表明以IFN-γ为代表的Th1细胞因子在银屑病发病机制中起重要作用。银屑病患者Th1细胞可分泌一系列细胞因子,如IFN-γ,YNF-β,IL-2等。有研究表明银屑病外周血Th1/Th2细胞因子(IFN-r/IL-2)表达中,IFN-r表达显著上调,而IL-4降低。
　　 紫草为紫草科紫草属的植物,有效成分:含乙酰紫草素(acetylshikonin)、β-羟基异戊酰紫草素(β-hydro-xyisovalerylshikonin)、紫草素(shikonin)、β,β-二甲基丙烯酰紫草素(β,β'-dimethylacrylshikonin)等。紫草的主要药理作用有抑菌抗病毒作用、抗肿瘤作用、抗炎症及调节免疫的作用、避孕、降血糖作用,对凝血及消化道平滑肌、循环系统皆有影响。其水提物、醇提物、醚提物都有此作用。紫草在皮肤科应用较广,作为治疗银屑病、病毒性皮肤病等的药物。有关紫草的研究主要是临床疗效的评价,对于其对银屑病治疗的机制研究很少。本实验拟通过对银屑病患者外周血单一核细胞的体外实验,检测两种主要的Th1/Th2型细胞因子(IFN-r、IL-4)的水平变化从而验证银屑病的Th1/Th2反应模式,以及中药紫草素对银屑病外周血PBMCs分泌Th1/Th2细胞因子的影响,为紫草治疗银屑病提供一定的理论依据。
　　 材料和方法：
　　 一、研究对象和主要试剂
　　 (一)研究对象
　　 1、银屑病患者来自中国医科大学附属第一医院皮肤科,经临床确诊为寻常型银屑病,共34名,男24名,女10名,年龄19-74岁(平均39±14岁),见附表1。病例要求①近一个月未接受任何系统治疗,如皮质类固醇、免疫抑制剂等。②无肿瘤及其它自身免疫性疾病。③近两周无感染史。④疾病处于进展期。
　　 2、正常人来自自愿献血者20名,男10名,女10名,年龄25-45岁(平均31±7岁),无银屑病及其它自身免疫性疾病史,见附表2。
　　 (二)主要试剂
　　 葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)购自上海华精生物科技公司、RPMI1640培养液和Hank's缓冲液购自沈阳博尔美公司、紫草素购自日本和光(Wako)生物试剂公司)、PHA购自Sigma公司、人IFN-r及IL-4ELISA试剂盒购自武汉博士德公司。
　　 二、实验方法
　　 (一)ELISA法检测血清IL4、IFN-r的含量
　　 空腹采取20名银屑病患者及20名正常人外周血5ml,离心分离血清,ELISA法检测IL-4、IFN-r的含量。
　　 (二)分离外周血单个核细胞(PBMCs)
　　 空腹采取14名银屑病患者及10名正常人外周血5ml,肝素抗凝,用Ficoll密度梯度法分离外周血单一核细胞(PBMC),以RPMI1640培养基配成1*106细胞/ml。
　　 (三)PBMCs的培养
　　 将PBMCs加入96孔培养板中,每个培养条件设二个复孔。放入37℃,5％CO2培养箱,培养72后收集上清液。正常人PBMCs分为两组:空白组(PBMCs+RPMI1640培养液)和PHA组(PBMCs+12.5ug/mlPHA+RPMI1640培养液)。将银屑病患者PBMCs分为八组,分组为:空白组(PBMCs+RPMI1640培养液)、低浓度紫草素组(PBMCs+2.5ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)、中浓度紫草素组(PBMCs+7ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)、高浓度紫草素组(PBMCs+12.5ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)、PHA组(PBMCs+12.5ug/mlPHA+RPMI1640培养液)、PHA+低浓度紫草素组(PBMCs+12.5 ug/mlPHA+2.5ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)、PHA+中浓度紫草素组(PBMCs+12.5ug/mlPHA+7ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)、PHA+高浓度紫草素组(PBMCs+12.5ug/mlPHA+12.5ug/ml紫草素+RPMI1640培养液)。
　　 (四)ELISA法检测各PBMCs培养上清液中IFN-r/IL-4含量
　　 实验结果：
　　 (一)病例组较对照组血清中IFN-r含量明显升高,IL-4含量下降
　　 与正常人相比,患者血清中IFN-r含量明显升高,血清中IL-4含量下降。
　　 (二)不同培养条件下PBMCs培养上清中IFN-r的水平
　　 PHA刺激下,银屑病患者和正常人均较无PHA刺激时PBMCs培养上清IFN-r明显升高。但不论有无PHA刺激,银屑病患者PBMCs培养上清IFN-r较正常人明显升高。随着紫草素浓度增加,银屑病患者PBMCs培养上清中IFN-r逐渐下降。
　　 (三)不同培养条件下PBMCs培养上清中IL-4的水平
　　 PHA刺激下,银屑病患者和正常人均较无PHA刺激时PBMCs培养上清IL-4明显升高。但不论有无PHA刺激,银屑病患者PBMCs培养上清中IL-4较正常人降低。随着紫草素浓度增加,银屑病患者PBMCs培养上清中IL-4逐渐升高。
　　 结论：
　　 紫草素能抑制Th1型细胞因子IFN-r的分泌,而促进Th2型细胞因子IL-4分泌。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述:Th1/Th2细胞因子及其与银屑病的关系

致谢

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