猪繁殖与呼吸综合征、猪2型圆环病毒病二联基因疫苗的构建及实验免疫研究

摘要

为构建猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Sydrome，PRRS)和猪2型圆环病毒病(Porcine Circovirus type 2 disease，PCV2)的二联基因疫苗，将PRRSV长春分离株的ORF5、ORF3基因和PCV2内蒙古分离株的ORF2基因，分别克隆至真核表达载体pIPES启动子CMV下游，构建成真核表达质粒pIRES-ORF2-ORF5、pIPES-ORF2-ORF5-ORF3。通过Western blotting以及IFA等检测证明，所构建的2个重组DNA疫苗质粒中的目的基因在真核细胞能进行有效的转录，并表达了目的蛋白。 将所构建的2个重组DNA疫苗质粒免疫Balb/c小鼠，检测了免疫小鼠的ELISA抗体水平、脾T淋巴细胞亚群数量和病毒特异性γ干扰素产生细胞的数量。结果表明，所构建的2个核酸疫苗pIPES-ORF2-ORF5和pIPES-ORF2-ORF5-ORF3均能有效刺激小鼠产生PRRSV和PCV2特异性抗体，有效刺激小鼠脾细胞中T淋巴细胞亚类的增殖和病毒特异性γ干扰素的产生，其细胞免疫水平显著高于灭活疫苗免疫组。本研究为进一步研究PRRSV和PCV2二联基因疫苗奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

文献综述

实验一猪繁殖与呼吸综合征、猪2型圆环病毒病二联基因疫苗的构建

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1重组质粒的构建及鉴定

2.2IFA检测

2.3 Western blotting检测

3讨论

4小结

实验二猪繁殖与呼吸综合征、猪2型圆环病毒病二联基因疫苗实验免疫研究

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1ELISA抗体检测结果

2.2 T细胞亚类记数

2.3病毒特异性γ干扰素的检测结果

3讨论

4小结

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文