乙酰肝素酶HPA与GA结合蛋白α在乳腺癌组织中的表达及意义

摘要

目的:乙酰肝素酶(HPA)是一种内源性β-葡萄糖苷醛酸内切酶,它的主要功能是降解基底膜和细胞外基质的主要成分—硫酸乙酰肝素。被降解后细胞微环境的屏障被破坏,从而促进肿瘤的侵袭和转移,而恶性肿瘤引起死亡的主要原因是肿瘤的浸润和转移。乙酰肝素酶高表达与病人的临床参数有紧密联系。
　　 Ets家族作为最大的信号依赖转录调控因子家族之一,介导细胞增殖、分化和恶性变,其过度表达和许多人类肿瘤的发生有着密切联系。GA结合蛋白(GABP)是Ets家族成员之一,GABP有两个亚型,GABPα和GABPβ,研究发现HPA启动子区域有两个GABPα结合位点,提示其在转录起始的调控作用。为观察乙酰肝素酶HPA与GABPα在乳腺组织中的表达及与临床病理参数因素的关系,采用免疫组化和蛋白印迹方法联合检测乙酰肝素酶HPA、GABPα在乳腺正常组织和乳腺癌组织中的表达情况,并对乙酰肝素酶HPA和GABPα的表达与临床病理各因素进行了统计分析,探讨两者在乳腺组织中表达的相关性。
　　 材料与方法:
　　 1、材料:124例乳腺组织标本来自2007年至2009年在中国医科大学附属第一医院行外科手术切除的乳腺组织(94例为乳腺浸润性导管癌,30例为正常乳腺组织)。标本经4％中性甲醛固定,石蜡包埋,HE常规染色后明确诊断。30例乳腺癌新鲜标本来自中国医科大学附属第一医院行外科手术切除的新鲜乳腺组织。乳腺组织离体后立即放入液氮后-70℃冰箱保存备用。
　　 2、免疫组织化学染色:兔抗人乙酰肝素酶HPA多克隆抗体购自Santa公司,鼠抗人GA结合蛋白α多克隆抗体购自上海生谷生物公司,SP免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。染色方法根据试剂盒说明进行。
　　 3、Western Blot蛋白印迹:将含80μg总蛋白的组织裂解产物进行10％SDS-PAGE电泳1.5h后,转印至PVDF膜(65V,2h),脱脂奶粉室温封闭2h,经TTBS冲洗3次,抗HPA多克隆抗体(1:300)和GABPα抗体(1:300)4℃孵育过夜后,辣根过氧化物酶标记二抗37℃孵育2h,。TTBS洗三次后ECL发光。以β-actin为内对照,比较各条带灰度值。
　　 4、统计分析:各组资料利用SPSS for Window11.5进行统计分析。P＜0.05有统计学意义。
　　 结果:乙酰肝素酶HPA与GA结合蛋白α在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常乳腺组织。并且与患者年龄、肿瘤直径大小之间没有明显差异,而与患者的组织学分级、TNM分期、淋巴结有无转移密切相关,且两者的关系为正相关。
　　 结论:在乳腺癌组织中,乙酰肝素酶HPA与GA结合蛋白α蛋白的表达变化与肿瘤的进展密切相关,且两者呈正相关关系,提示乙酰肝素酶HPA和GABPα在乳腺癌的发生发展、浸润转移中发挥着重要的协同作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略语

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 乙酰肝素酶的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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