羧甲基壳聚糖及其复合物对粪肠球菌抑菌作用的实验研究

摘要

目的:
　　 壳聚糖(ChLitosan)由天然多糖甲壳素经脱乙酰化处理而成,是生物相容性和水解性较好的低聚糖,具有较好的广谱抗菌性。羧甲基壳聚糖(CarboxymenthylChitosan,CMCS)是壳聚糖经羧甲基化反应后的一类甲壳素衍生物,它既保留了壳聚糖的优点,又极大的改善了水溶性,因而有更为广泛的用途,其抗菌性能一直是医药界研究的热点。本实验通过建立粪肠球菌(E.faeclis)的体外实验模型,采用纸片扩散法体外评价羧甲基壳聚糖及其氯已定复合物对粪肠球菌抑菌效果及浓度的依赖关系。
　　 材料与方法:
　　 一、细菌复苏鉴定,绘制生长曲线
　　 复苏培养粪肠球菌冻干菌株ATCC29212,采用全自动微生物鉴定仪进行鉴定采用比浊法测定并绘制细菌的生长曲线。
　　 二、纸片扩散法评价羧甲基壳聚糖抑菌活性
　　 1、筛选羧甲基壳聚糖最佳抑菌浓度
　　 采用纸片扩散法筛选羧甲基壳聚糖最佳抑菌浓度,通过观察测量抑菌环直径比较不同浓度醋酸溶剂下羧甲基壳聚糖抑菌效果。
　　 2、筛选羧甲基壳聚糖氯已定复合物最佳抑菌浓度
　　 采用纸片扩散法筛选羧甲基壳聚糖氯已定复合物最佳抑菌浓度,观察其抑菌效果。
　　 3、评价羧甲基壳聚糖及其复合物抑菌效果
　　 以氯已定作为对照,采用纸片扩散法药敏实验观察羧甲基壳聚糖,羧甲基壳聚糖氯已定复合物对粪肠球菌的抑制效果,并测量抑菌环直径大小(mill),评价实验药物对粪肠球菌的抑制作用。
　　 三、统计分析
　　 所有数据采用SPSS13.0软件包进行统计学分析,采用单因素方差分析及SNK-q检验,P＜0.05时有差别,P＜0.01时有显著性差别。
　　 结果:
　　 1、粪肠球菌生长曲线可见迟缓期,对数生长期及稳定期3个阶段,生长期角度较大。
　　 2、羧甲基壳聚糖溶于浓度为2%的醋酸溶液中抑菌效果最好,浓度为5.0mg/ml的羧甲基壳聚糖抑菌效果较好(P＜0.05):浓度为140mg/ml的羧甲基壳聚糖氯已定复合物抑菌效果较好(P＜0.05):与对照组氯已定溶液相比较,抑菌效果为140m咖l的羧甲基壳聚糖氯已定复合物优于单纯氯已定溶液,优于5.0mg/ml羧甲基壳聚糖(P＜0.05).
　　 结论:
　　 1、粪肠球菌存在明显对数生长期。
　　 2、羧甲基壳聚糖,羧甲基壳聚糖氯已定复合物对粪肠球菌均有抑制作用,且羧甲基壳聚糖氯已定复合物抑菌效果优于单纯羧甲基壳聚糖。