联合应用生长抑素和前列腺素E1对大鼠极限肝切除术后急性肝损伤的保护作用及其机制的研究

摘要

目的：
　　 探讨联合应用生长抑素和前列腺素E1对大鼠极限肝切除术后急性肝损伤的保护作用及其机制的研究。
　　 材料和方法
　　 采用大鼠90％肝切除动物模型，将64只大鼠随机分为4组，用于肝大部切除术后肝功能损害的研究:单纯肝大部切除术组，即对照组（Control Group，C组）16只，生长抑素治疗组(Somatostatin Group，S组)16只，前列腺素E1治疗组（Prostaglandin E1 Group，P组）16只和联合用药治疗组（Mixed Group， M组）16只。四组大鼠均分别在肝切除术后10分钟、6小时、12小时和24小时这4个时间点进行观察，共分为16个亚组，分别为:C0、C6、C12、C24，S0、S6、S12、S24，P0、P6、P12、P24，M0、M6、M12、M24。每个亚组4只大鼠，于各时点进行标本采集。血清标本进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)测定。检测相应时间点的门静脉压力值。检测肝组织湿重并计算肝重体重比。肝组织HE染色观察光镜下形态学改变，并用TUNEL法检测肝细胞凋亡指数。血清标本用于检测细胞因子(TNF-α、IL-6)以及抗氧化酶(SOD、GSH)的水平。肝组织冷冻标本用于检测细胞因子（TNF-α、IL-6）、抗氧化酶(SOD、GSH)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase3、HSP70)以及内质网应激相关调节蛋白(CGRP78、PERK、ATF6、CHOP)的表达。另外选取40只大鼠随机分为相应的4组，观察术后生存时间，进行术后生存时间的统计和分析。
　　 结果：
　　 1、肝功能检测:肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）血清ALT、AST、ALP和TB水平与单纯肝切除对照组（C组）比较均明显下调(P＜0.05)，而血清ALB水平各组间无显著性差异。
　　 2、肝重体重比测定:肝切除术后24h，联合用药组（M组）肝重体重比与单纯肝切除对照组（C组）和生长抑素组（S组）比较略有增加(P＜0.05，P＜0.05)。
　　 3、光镜下病理组织形态学检查:药物处理组（S组、P组和M组）与单纯肝切除对照组（C组）比较，肝细胞肿胀变性坏死及空泡样变性、肝小叶结构排列紊乱、汇管区炎症等肝细胞损害程度均有所减轻，其中以联合用药组（M组）减轻最明显。
　　 4、生存时间分析:生长抑素组（S组）和前列腺素E1组（P组）生存时间较单纯肝切除对照组（C组）延长(P＜0.05)，而联合用药组（M组）生存时间较C组明显延长(P＜0.001)。
　　 5、门静脉压力值测定:肝切除术后10min和6h，药物处理组（S组、P组和M组）门静脉压力值与单纯肝切除对照组（C组）比较均明显下调(P＜0.01);肝切除术后12h，生长抑素组（S组）和联合用药组（M组）门静脉压力值与C组比较均明显下调(P＜0.05);肝切除术后24h，C组门静脉压力值仍然高于基础门静脉压力值，但S组、P组和M组门静脉压力值与基础门静脉压力值比较均已无显著性差异。
　　 6、血清和肝组织肿瘤坏死因子--α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平:
　　 (1)血清ELISA法检测:肝切除术后24h与术后10min、6h及12h比较，各组血清TNF-α水平均明显升高。肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）血清TNF-α水平与单纯肝切除对照组（C组）比较均明显下调(P＜0.001)，并且前列腺素E1组（P组）和联合用药组（M组）血清TNF-α水平分别低于生长抑素组（S组）(P＜0.001，P＜0.01)。肝切除术后24h与术后10min、6h及12h比较，各组血清IL-6水平均明显升高。肝切除术后24h，S组、P组和M组血清IL-6水平与C组比较均明显下调(P＜0.001)。(2)肝组织Western blot法检测:肝切除术后24h与术后10min比较，C组肝组织TNF-α水平明显升高。肝切除术后24h，S组、P组和M组肝组织TNF-α水平与C组比较均明显下调，其中M组肝组织TNF-α水平又低于S组和p组(P＜0.01，P＜0.01)。肝切除术后24h与术后10min比较，C组肝组织IL-6水平亦明显升高。肝切除术后24h，S组、P组和M组肝组织IL-6水平与C组比较均明显下调(P＜0.01)，其中M组肝组织IL-6水平又低于S组和P组(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 7、血清和肝组织抗氧化酶SOD、GSH水平:随着术后时间的延长，各组血清和肝组织SOD和GSH的水平逐渐升高恢复;与单纯肝切除对照组（C组）比较，药物处理组（S组、P组、M组）可明显升高血清和肝组织SOD和GSH的水平(P＜0.05)。
　　 8、TUNEL法检测肝细胞凋亡指数:随着术后时间的延长，各组肝细胞凋亡指数（Apoptotic Index，AI）逐渐升高。肝切除术后12h，药物处理组（S组、P组和M组）AI值与单纯肝切除对照组（C组）比较均明显下调(P＜0.05)。肝切除术后24h，药物处理组(S组、P组和M组)AI值与C组比较均明显下调(P＜0.001);与生长抑素组（S组）和前列腺素E1组（P组）比较，联合用药组（M组）AI值明显下调(P＜0.001，P＜0.05)。
　　 9、Western blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase3和HSP70蛋白表达水平:肝切除术后24h与术后10min比较，单纯肝切除对照组（C组）Bcl-2和HSP70蛋白表达水平明显降低。肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）Bcl-2和HSP70蛋白表达水平与C组比较均上调(P＜0.01)，其中以联合用药组（M组）上调最明显(P＜0.01)。肝切除术后24h与术后10min比较，C组Bax和Caspase3蛋白表达水平明显升高;而肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）Bax和Caspase3蛋白表达水平与C组比较均下调(P＜0.01)，其中以M组下调最明显(P＜0.01)。
　　 10、Western blot法检测GRP78、PERK、ATF6和CHOP蛋白表达水平:肝切除术后24h与术后10min比较，单纯肝切除对照组（C组）GRP78蛋白表达水平明显降低;而肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）GRP78蛋白表达水平与C组比较表达上调(P＜0.01)，其中以联合用药组（M组）上调最明显(P＜0.01)。肝切除术后24h与术后10rmin比较，C组PERK、ATF6和CHOP蛋白表达水平均明显升高;而肝切除术后24h，药物处理组（S组、P组和M组）PERK、ATF6和CHOP蛋白表达水平与C组比较均下调(P＜0.01)，其中以M组下调最明显(P＜0.01)。
　　 结论：
　　 1、联合应用生长抑素和前列腺素E1对大鼠极限肝切除术后急性肝损伤具有明显的保护作用，且对肝切除术后早期的肝再生有一定的促进作用。
　　 2、联合应用生长抑素和前列腺素E1能有效延长大鼠极限肝切除术后的生存时间，改善预后。
　　 3、联合应用生长抑素和前列腺素E1可以减轻大鼠极限肝切除术后早期肝损伤的程度，其作用机制可能是通过降低肝切除术后过高的门静脉压力，降低TNF-α、IL-6等炎症细胞因子的表达，增强SOD、GSH等抗氧化物的表达，有效抑制过度炎症反应，从而减轻对残肝组织的损伤，保护肝功能。
　　 4、联合应用生长抑素和前列腺素E1可以减轻大鼠极限肝切除术后早期出现的内质网应激状态，上调GRP78、HSP70和Bcl-2的表达，抑制PERK、ATF6、CHOP、Bax和Caspase3的表达，减轻继发的肝细胞凋亡，缓解残肝组织的损伤，保护肝功能。

目录

声明

摘要

英文缩略语

论文一 联合应用生长抑素和前列腺素E1对大鼠极限肝切除术后急性肝损伤的保护作用

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

论文二 联合应用生长抑素和前列腺素E1对大鼠极限肝切除术后急性肝损伤的保护作用机制

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

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致谢

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