母孕期慢性温和性应激对子代大鼠条件化恐惧的消除、海马神经再生、GSK-3α、β以及NR2B表达的影响

摘要

应激性生活事件常给孕妇带来精神压力或创伤，不但使孕妇产生焦虑、恐惧、抑郁情绪，而且能够影响子代终身的神经发育，导致子代在认知功能、情绪行为等方面的损害。许多动物实验表明孕期应激与子代抑郁和焦虑行为有关。孕期应激可使子代发生脑功能性改变，使其在条件化恐惧中的焦虑行为更加显著。本实验利用慢性温和性应激模型来探讨子代雄性大鼠在条件化恐惧的消除过程中行为学的改变，以及在这个过程中孕期应激对子代海马神经元可塑性的影响。
　　 材料与方法：
　　 一、实验材料
　　 1、实验动物SD大鼠雌雄各24只，体重250-300克（中国医科大学实验动物中心提供）。子代雄性SD大鼠118只，体重250-395克。
　　 2、主要试剂大鼠抗BrdU抗体（Abcam，ab6326）、GSK-3β抗体(Abcam，ab131356)、NR2B抗体（Abcam，ab65783）、SABC免疫试剂盒、DAB显色剂（武汉博士德公司）、辣根过氧化物酶羊抗兔lgG(ProteinTech Group，SA00001-2)、聚偏二氟乙烯膜、预染彩色蛋白分子量Marker(南京凯基生物有限公司)、SuperSignalWest Pico(Thermo,NC15079)。
　　 3、实验仪器ZH-DSX2大鼠穿梭箱（安徽淮北正华科技公司）、显微镜(NIKON，Japan)、切片机(LEICA，Germany)、匀浆机(HEIDOLPHC，Germany)、高速冰冻离心机(HITACHI，Japan)、紫外可见分光光度计(HITACHI，Japan)、电泳仪(BIO-RAD，USA)、转印仪(BIO-RAD，USA)、凝胶成像系统(UVP, USA)。
　　 二、实验方法
　　 1、动物分组及模型制作将子代雄鼠按照母孕期是否接受过慢性温和性应激分为暴露组PNS(prenatal chronic mild stress)和控制组CON(control)。在两组大鼠成年后进行条件化恐惧实验。
　　 2、分子生物学实验应用免疫组织化学ABC法检测子代雄性大鼠海马区神经再生数量的变化。运用及蛋白印迹技术研究GSK-3α、GSK-3β、NR2B表达量的差异。
　　 实验结果：
　　 1、在PND21和PND90时，PNS组大鼠体重均显著小于CON组(p＜0.05);
　　 2、在条件化恐惧的消去实验中，从第3天到第7天，PNS组的僵住行为显著高于CON组（p＜0.05-p＜0.001）;
　　 3、免疫组化结果显示，PNS组大鼠海马区新生细胞数显著小于CON组(p＜0.01);
　　 4、蛋白印迹结果显示PNS组大鼠海马区GSK-3α、GSK-3β和NR2B的表达显著高于CON组(p＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、PNS组大鼠在断奶和三月龄时体重均低于CON组，表明孕期应激对子代体重产生的抑制作用;
　　 2、消除过程中，PNS组的僵住行为显著高于CON组，表明孕期慢性温和性应激对子代条件化恐惧的消除有抑制作用;
　　 3、孕期应激致使海马区GSK-3α、GSK-3β和NR2B在PNS组表达均增多，神经再生减少，进而损伤了条件化恐惧消除的能力。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

实验材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

实验结果

一、体重

二、条件化恐惧的消除

三、免疫组化测定大鼠海马神经元再生

四、蛋白印迹检测大鼠海马GSK-3α、GSK-3β的表达

五、蛋白印迹检测大鼠海马NR2B的表达

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述

致谢

个人简介