大鼠颌下腺细胞与含血管内皮生长因子(VEGF)的丝素-壳聚糖支架体外复合培养的实验研究

摘要

目的:
　　 研究含血管内皮生长因子(VEGF)的丝素-壳聚糖支架(Silk fibroin-chitosanscaffcold)对大鼠颌下腺细胞（Rat submandibular gland cells RSGCs）粘附、增殖、分泌作用的影响。
　　 方法:
　　 应用体外组织块法原代培养3d龄Wistar大鼠的颌下腺细胞，免疫组织化学法鉴定来源、胰酶消化法和差速贴壁法纯化、传代扩增。冻干技术制作含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为实验组，不含VEGF的丝素-壳聚糖支架作为对照组。支架的规格为5mm×5mm×5mm，用作实验组的每个支架含VEGF浓度为10ng/ml。将浓度为5.0×106/ml的第二代大鼠颌下腺细胞悬浊液分别接种于含有VEGF的丝素-壳聚糖支架（实验组）和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架（对照组）进行培养。
　　 测定实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞的粘附率，免疫组化法鉴定细胞来源。免疫荧光法观察细胞在支架上的生长情况，MTT法检测接种后实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞增殖情况。扫描电镜观察接种大鼠颌下腺细胞在支架上生长的超微结构。测定1d-9d培养复合物上清液中淀粉酶含量，检测实验组和对照组的大鼠颌下腺细胞分泌功能。采用SPSSfor windows13.0统计分析软件对结果进行方差分析，检验水准α=0.05，P＜0.05有统计学意义。
　　 结果:
　　 将纯化扩增的大鼠颌下腺细胞与含VEGF的丝素-壳聚糖支架和不含VEGF的丝素-壳聚糖支架成功的复合培养。细胞粘附率检测:实验组粘附率高于对照组，2h、24h时P＞0.05;4h、8h、12 h时P＜0.05。细胞增殖结果显示（MTT法）:接种后1d，实验组细胞数量略大于对照组(P＞0.05)，而3d-9d，两组支架上的细胞数量有显著性差异(P＜0.05)，实验组优于对照组。细胞上清液中淀粉酶含量检测:两组大鼠颌下腺细胞上清液的淀粉酶分泌量均有不同程度的增加，从3d-9d实验组优于对照组，淀粉酶含量差异有统计学意义(P＜0.05)。扫描电子显微镜观察:丝素-壳聚糖支架呈海绵状结构，植入初期大鼠颌下腺细胞成圆形，散在的粘附于丝素-壳聚糖支架网孔内，实验组生长情况明显优于对照组。
　　 结论:
　　 含血管内皮生长因子的丝素-壳聚糖支架对大鼠的颌下腺细胞的粘附、增殖、分泌有促进作用。

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